长期传代培养中悬浮MDCK细胞生长与流感病毒生产稳定性
发布时间:2022-01-13 18:49
犬肾细胞(Madin Darby Canine Kidney,MDCK)作为流感病毒类疫苗生产最常用的细胞系之一。前人研究发现,贴壁MDCK细胞作为连续细胞系在长期传代过程中会出现细胞形态、生长能力改变,流感病毒生产能力下降等不稳定问题。但更具应用价值的无血清悬浮MDCK细胞经长期传代后,其生产流感病毒过程的稳定性特征尚不明确。因此,有必要对长期传代培养过程中的悬浮MDCK细胞形态、生长能力以及生产流感病毒过程的稳定性进行研究。本文以悬浮MDCK细胞生产H9N2禽流感病毒过程为研究对象。首先,对实验室已有的悬浮MDCK细胞进行长达200天以上传代培养,获得P1、P29、P63、P88、P111多个代次悬浮MDCK细胞。在考察各代次细胞形态以及生长稳定性中,发现各代次细胞形态相似且良好,无明显结团现象;在传代培养以及批培养过程中5个代次细胞比生长速率、细胞直径、细胞活率之间无显著性差异,生长能力维持稳定。在病毒生产稳定性的考察中,以P1、P29、P88、P111共4个代次悬浮MDCK细胞为研究对象,实验结果表明,血凝效价(HA滴度)与单细胞产毒率(Svy)均随着细胞代次的增加而增加,其中...
【文章来源】:华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】:83 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
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【参考文献】:
期刊论文
[1]埃博拉疫苗研究进展[J]. 潘卫兵,刘莹. 医学信息. 2020(01)
[2]MDCK悬浮细胞制备及流感病毒敏感性研究[J]. 李自良,王家敏,赵彩红,王美皓,李莉,张雪梅,李倬,靳冬武,马忠仁,乔自林. 中国人兽共患病学报. 2019(11)
[3]悬浮MDCK细胞培养H7N9流感病毒时TPCK胰酶添加量的优化研究[J]. 孟子延,张家友,刘琛,张哲罡,邱冉,罗丹,施金荣,赵巍,夏志武,杨晓明. 中华微生物学和免疫学杂志. 2019 (11)
[4]基于细胞培养的流感疫苗研究进展[J]. 罗剑,李秀玲. 中国新药杂志. 2019(21)
[5]哺乳动物细胞生产人用灭活疫苗相关技术进展[J]. 白仲虎,李昕然,王荣斌,刘学荣,安芳兰,张云德,刘秀霞,刘春立,杨艳坤. 中国细胞生物学学报. 2019(10)
[6]细胞基质流感疫苗的研究[J]. 刘婷,赵慧,李长贵. 微生物学免疫学进展. 2019(04)
[7]犬细小病毒通过促进ROS产生/线粒体损伤诱导宿主细胞的凋亡[J]. 王岩,张建楼,赵轶男,王晓敏,王猛,李笑然,仲飞. 河北农业大学学报. 2019(03)
[8]利用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达人白蛋白基因的中国仓鼠卵巢细胞系[J]. 周松涛,陈蕴,龚笑海,金坚,李华钟. 中国生物工程杂志. 2019(04)
[9]流感疫苗的研究进展[J]. 严延生. 中国人兽共患病学报. 2018(08)
[10]传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响[J]. 王济舟,曾宇,宋烨,漆松涛. 分子影像学杂志. 2017(02)
博士论文
[1]基于MDCK细胞高密度培养的甲型流感病毒疫苗生产工艺开发与优化[D]. 黄锭.华东理工大学 2016
[2]草氨酸钠抑制乳酸脱氢酶对鼻咽癌生长及放射敏感性的影响[D]. 翟小明.苏州大学 2014
硕士论文
[1]H9N2亚型禽流感病毒感染鹌鹑肺的转录组学研究[D]. 冯贺龙.华中农业大学 2019
[2]基于MDCK细胞悬浮培养扩增H9N2流感病毒的维持培养基开发及应用[D]. 谢盼.华东理工大学 2019
[3]HD11细胞感染H9N2 AIV与LPS刺激后mRNA表达谱及炎症信号通路的变化[D]. 薛甜霞.西北农林科技大学 2019
[4]猪瘟病毒感染细胞的代谢组学及葡萄糖促进猪瘟病毒增殖的研究[D]. 张必凯.中国人民解放军军事医学科学院 2017
[5]无血清悬浮培养MDCK细胞生产H9亚型禽流感疫苗的关键控制点探究[D]. 彭雯娟.华东理工大学 2017
本文编号:3586959
【文章来源】:华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】:83 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图3.1研究思路框图??Fig.?3.1?The?research?block?diagram??3.3实验方案??首先使用实验室自主研发无血清培养基对悬浮MDCK细胞进行长期传代培养,获??
第22页?华东理工大学硕士学位论文??图3.2。可见,在长达200天的传代过程中本实验所用悬浮MDCK细胞形态保持稳定。??議圓麵??图3.2不同代次悬浮MDCK细胞形态??Fig.?3.2?Morphology?of?suspended?MDCK?cells?in?different?passages??3.4.1.2细胞代次对传代培养中生长特性的影响??为研究悬浮MDCK细胞长期传代过程中细胞生长的稳定性,本研宄以Pl、P29、??P63、P88、P1115个代次细胞为研究对象。??|?12^??18-r^???^?PI?-m-?P29?-a-?P63?,??||_?1???—?01?i?u?ii?iii?〇?????^???i???i??>?0?2?4?6?8?10?12?14?16?0?2?4?6?8?10?12?14?16??Time(d)?Time(d)??C??1.4-1???1.2-??i.〇-??pi??^?0.8-??3?P29??11?〇,6"?+?P63??〇?4-??+?P88??〇?2-??W?乂?Pill??()?〇?I?i?i?i?i?i?i?i??0?2?4?6?8?10?12?14?16??Time(d)??图3.3不同代次MDCK细胞传代过程中细胞生长情况(A)、细胞直径(B)与比生长速率的变化(C)??Fig.?3.3?MDCK?cell?growth?(A),?diameter?(B)?and?specific?growth?rate?(C)?of?different?passages?during??long?time?cult
第22页?华东理工大学硕士学位论文??图3.2。可见,在长达200天的传代过程中本实验所用悬浮MDCK细胞形态保持稳定。??議圓麵??图3.2不同代次悬浮MDCK细胞形态??Fig.?3.2?Morphology?of?suspended?MDCK?cells?in?different?passages??3.4.1.2细胞代次对传代培养中生长特性的影响??为研究悬浮MDCK细胞长期传代过程中细胞生长的稳定性,本研宄以Pl、P29、??P63、P88、P1115个代次细胞为研究对象。??|?12^??18-r^???^?PI?-m-?P29?-a-?P63?,??||_?1???—?01?i?u?ii?iii?〇?????^???i???i??>?0?2?4?6?8?10?12?14?16?0?2?4?6?8?10?12?14?16??Time(d)?Time(d)??C??1.4-1???1.2-??i.〇-??pi??^?0.8-??3?P29??11?〇,6"?+?P63??〇?4-??+?P88??〇?2-??W?乂?Pill??()?〇?I?i?i?i?i?i?i?i??0?2?4?6?8?10?12?14?16??Time(d)??图3.3不同代次MDCK细胞传代过程中细胞生长情况(A)、细胞直径(B)与比生长速率的变化(C)??Fig.?3.3?MDCK?cell?growth?(A),?diameter?(B)?and?specific?growth?rate?(C)?of?different?passages?during??long?time?cult
【参考文献】:
期刊论文
[1]埃博拉疫苗研究进展[J]. 潘卫兵,刘莹. 医学信息. 2020(01)
[2]MDCK悬浮细胞制备及流感病毒敏感性研究[J]. 李自良,王家敏,赵彩红,王美皓,李莉,张雪梅,李倬,靳冬武,马忠仁,乔自林. 中国人兽共患病学报. 2019(11)
[3]悬浮MDCK细胞培养H7N9流感病毒时TPCK胰酶添加量的优化研究[J]. 孟子延,张家友,刘琛,张哲罡,邱冉,罗丹,施金荣,赵巍,夏志武,杨晓明. 中华微生物学和免疫学杂志. 2019 (11)
[4]基于细胞培养的流感疫苗研究进展[J]. 罗剑,李秀玲. 中国新药杂志. 2019(21)
[5]哺乳动物细胞生产人用灭活疫苗相关技术进展[J]. 白仲虎,李昕然,王荣斌,刘学荣,安芳兰,张云德,刘秀霞,刘春立,杨艳坤. 中国细胞生物学学报. 2019(10)
[6]细胞基质流感疫苗的研究[J]. 刘婷,赵慧,李长贵. 微生物学免疫学进展. 2019(04)
[7]犬细小病毒通过促进ROS产生/线粒体损伤诱导宿主细胞的凋亡[J]. 王岩,张建楼,赵轶男,王晓敏,王猛,李笑然,仲飞. 河北农业大学学报. 2019(03)
[8]利用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达人白蛋白基因的中国仓鼠卵巢细胞系[J]. 周松涛,陈蕴,龚笑海,金坚,李华钟. 中国生物工程杂志. 2019(04)
[9]流感疫苗的研究进展[J]. 严延生. 中国人兽共患病学报. 2018(08)
[10]传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响[J]. 王济舟,曾宇,宋烨,漆松涛. 分子影像学杂志. 2017(02)
博士论文
[1]基于MDCK细胞高密度培养的甲型流感病毒疫苗生产工艺开发与优化[D]. 黄锭.华东理工大学 2016
[2]草氨酸钠抑制乳酸脱氢酶对鼻咽癌生长及放射敏感性的影响[D]. 翟小明.苏州大学 2014
硕士论文
[1]H9N2亚型禽流感病毒感染鹌鹑肺的转录组学研究[D]. 冯贺龙.华中农业大学 2019
[2]基于MDCK细胞悬浮培养扩增H9N2流感病毒的维持培养基开发及应用[D]. 谢盼.华东理工大学 2019
[3]HD11细胞感染H9N2 AIV与LPS刺激后mRNA表达谱及炎症信号通路的变化[D]. 薛甜霞.西北农林科技大学 2019
[4]猪瘟病毒感染细胞的代谢组学及葡萄糖促进猪瘟病毒增殖的研究[D]. 张必凯.中国人民解放军军事医学科学院 2017
[5]无血清悬浮培养MDCK细胞生产H9亚型禽流感疫苗的关键控制点探究[D]. 彭雯娟.华东理工大学 2017
本文编号:3586959
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