TCEA3通过ANXA1介导TGF-β通路进而影响小鼠成肌细胞分化
发布时间：2022-01-16 23:12
骨骼肌生成是一个高度有序的过程,包括成肌细胞的增殖、细胞融合形成肌管以及这些肌管进一步分化为肌纤维。这一过程需要依赖转录因子和信号转导途径之间的连续级联调节作用。实验室之前的一项研究表明,TCEA3能促进牛骨骼肌卫星细胞的分化,但是其作用的分子机制尚不清楚。本实验以小鼠为模型,研究TCEA3的作用及分子机制。TCEA3是转录延伸因子家族的成员。其不仅可以促进转录,在细胞质中还行使其他作用。我们通过免疫共沉淀实验发现ANXA1与TCEA3相互作用,我们推测TCEA3和ANXA1在小鼠成肌细胞分化的过程中扮演重要角色。在本研究中,我们检测了TCEA3和ANXA1在C2C12成肌细胞中的表达,定位和作用;检测了TCEA3在过表达和抑制后蛋白质表达量的变化和肌纤维数量的改变;并发现TCEA3与ANXA1相互作用通过调节TGF-β途径影响细胞分化;以此说明TCEA3在小鼠成肌细胞分化中的作用。主要获得的研究结果如下:（1）随着C2C12成肌细胞肌管的增加TCEA3的表达逐渐增加。在增殖期（0 D）和不同分化期（分化1-9 D）间,随着C2C12成肌细胞肌管逐渐增加,TCEA3的荧光强度逐渐增加。...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pEGFP-N2载体质粒图谱
东北农业大学理学硕士学位论文合成。表 2-2 TCEA3 基因的激活靶序列ab. 2-2 Four sgRNAs targeting different sites of TCEA3 promoter regio. 序列3-1 CACCGCTTGGGCATAGCTCCCTCT3-2 CACCGCCACCCCTCCCCCCAGCGA3-3 CACCGTGTCCCGGAAGAAGACGGA3-43-5CACCGAAGAAGACGGAAGGGGCCCCACCGGCCCCTGCTACCTCACCG pSPgRNA 载体：pSPgRNA 载体见图 2-2，酶切体系如表 2-3。
绿色荧光表示 TCEA3 蛋白的分布，蓝色表示核的存在。标尺：100μm。图 3-2 免疫荧光检测 TCEA3 在 C2C12 细胞中的定位。.3-2 Immunofluorescence detection localization of TCEA3 at C2C12 cell differentiation 核质蛋白提取检测 TCEA3 在 C2C12 成肌分化不同时期的定位别收集分化 0 天（0 D）、3 天（3 D）、5 天（5 D）的 C2C12 成肌细胞，根据核质蛋剂盒上的步骤进行核质蛋白分离。采用 Western Blot 检测这三个时期 TCEA3 蛋白表。实验结果表明，TCEA3 主要在细胞质中表达，随着分化的进展，TCEA3 的表达趋势。
【参考文献】：
期刊论文
[1]The effects of microRNA-34a regulating Notch-1/NF-κB signaling pathway on lipopolysaccharide-induced human umbilical vein endothelial cells[J]. Yun Ge,Man Huang,Yue-feng Ma. World Journal of Emergency Medicine. 2017(04)
[2]TGF-β and BMP signaling in osteoblast,skeletal development,and bone formation,homeostasis and disease[J]. Mengrui Wu,Guiqian Chen,Yi-Ping Li. Bone Research. 2016(01)
本文编号：3593597
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pEGFP-N2载体质粒图谱
东北农业大学理学硕士学位论文合成。表 2-2 TCEA3 基因的激活靶序列ab. 2-2 Four sgRNAs targeting different sites of TCEA3 promoter regio. 序列3-1 CACCGCTTGGGCATAGCTCCCTCT3-2 CACCGCCACCCCTCCCCCCAGCGA3-3 CACCGTGTCCCGGAAGAAGACGGA3-43-5CACCGAAGAAGACGGAAGGGGCCCCACCGGCCCCTGCTACCTCACCG pSPgRNA 载体：pSPgRNA 载体见图 2-2，酶切体系如表 2-3。
绿色荧光表示 TCEA3 蛋白的分布，蓝色表示核的存在。标尺：100μm。图 3-2 免疫荧光检测 TCEA3 在 C2C12 细胞中的定位。.3-2 Immunofluorescence detection localization of TCEA3 at C2C12 cell differentiation 核质蛋白提取检测 TCEA3 在 C2C12 成肌分化不同时期的定位别收集分化 0 天（0 D）、3 天（3 D）、5 天（5 D）的 C2C12 成肌细胞，根据核质蛋剂盒上的步骤进行核质蛋白分离。采用 Western Blot 检测这三个时期 TCEA3 蛋白表。实验结果表明，TCEA3 主要在细胞质中表达，随着分化的进展，TCEA3 的表达趋势。
【参考文献】：
期刊论文
[1]The effects of microRNA-34a regulating Notch-1/NF-κB signaling pathway on lipopolysaccharide-induced human umbilical vein endothelial cells[J]. Yun Ge,Man Huang,Yue-feng Ma. World Journal of Emergency Medicine. 2017(04)
[2]TGF-β and BMP signaling in osteoblast,skeletal development,and bone formation,homeostasis and disease[J]. Mengrui Wu,Guiqian Chen,Yi-Ping Li. Bone Research. 2016(01)
本文编号：3593597
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3593597.html
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