塞内卡谷病毒中和性单克隆抗体制备及中和表位鉴定
发布时间：2022-01-23 02:15
塞内卡谷病毒（Seneca Valley virus,SVV）是小RNA病毒科（Picornaviridae）,塞内卡病毒属（Senecavirus）的唯一成员。2002年研究学者从人胚胎视网膜细胞（PER.C6）培养物的污染物中分离得到SVV-001,2007年首次报道了猪群SVV感染与猪特发性水疱病（Porcine Idiopathic Vesicular Disease,PIVD）有关,随后陆续在美国、巴西、中国、泰国、哥伦比亚和越南等国家也有SVV感染的相关报道。SVV感染主要引起猪口腔粘膜,鼻吻和冠状水泡和溃疡病变,然后造成跛行,厌食,嗜睡等症状;7日龄内新生仔猪感染SVV的病死率约为30%至70%,时常伴有腹泻症状。SVV的结构蛋白在SVV感染以及产生中和性抗体的过程中起着至关重要的作用,但对于SVV的中和抗体的制备和研究却没有报道。本研究旨在制备SVV全病毒结构蛋白的中和抗体并鉴定出中和表位,为探索SVV基因组结构和功能,和利用中和抗体对SVV进行免疫防治皆有深远意义。本研究以SVV-LNSY01-2017株为研究对象,用该纯化的病毒免疫6周龄的BABL/C雌性小鼠,经过...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
塞内卡谷病毒粒子平面和三维结构(ViralZone2015)
塞内卡谷病毒中和性单克隆抗体制备及中和表位鉴定3图1-2SVV基因组结构（Segalesetal2016）Fig.1-2ThegenomestructureoftheSVV1.2.2.1前导蛋白L塞内卡谷病毒的前导蛋白L全长含99个氨基酸，与同样包含L蛋白的心病毒，肺炎病毒，狂犬病毒，柯布病毒，破骨病毒和细小病毒属别不同。它的蛋白序列缺乏蛋白水解活动所需的催化残基位点，既不含有“锌指”构象基序[C-x-H-x(6)-C-c(2)-C]，也不含有磷酸化酪氨酸基序[K-x(2)-E-x(2)-Y]（黄健强等2019），表明SVV的前导蛋白Ｌ可能具有独特的功能，具体功能尚待确定。1.2.2.2病毒结构蛋白P1病毒结构蛋白P1可以被3C蛋白酶分解为三个亚基蛋白，依次为VP0、VP3和VP1，VP0蛋白成熟之后会分解为VP4蛋白和VP2蛋白，因此结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1是形成病毒衣壳的主要单位，用于病毒衣壳的合成（Halesetal2008）。VP1、VP2和VP3蛋白在病毒结构上形成正三角形，以20个这样的正三角形组装成正20面体，分布于衣壳外表面，剩余的VP4蛋白处于正20面体内表面（ViralZone2015）。有研究显示该三种蛋白亲水性较高，更容易产生抗原表位，病毒侵入机体更容易诱导机体产生中和抗体，从而实现消灭入侵病毒的作用，因而这3种结构蛋白在机体抵御SVV感染过程中发挥关键作用（Maggiolietal2018）。结构蛋白VP1的氨基酸序列比较保守，在SVV不同分离株中同源性比对95.8%至100%，但是与其他小RNA病毒的同源性比较远，所以VP1蛋白可以作为检测对象以区分其他病原体（Gimenez-Lirolaetal2016）。1.2.2.3非结构蛋白P2和P3P2和P3基因组区域主要编码病毒非结构蛋白，参与病毒蛋白质的加工和病毒的复制（Segalesetal2016）。P2基因组可编码三种非结构蛋白2A、2B和2C。其中2A蛋白包含小RNA病毒科病毒的保守基序NPG/P模体作为结尾，但只
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文6图1-3SVV感染的临床症状（Lemeetal2017）Fig.1-3TheclinicalandpathologicoutcomesofSVVinfection1.5塞内卡谷病毒感染猪的病理变化猪感染SVV后死亡，在进行病亡剖检时，发现腹泻的仔猪中有很大一部分表现出皮下或肠系膜水肿，并且大多数仔猪的胃中存留大量母乳（Stevenetal2017）。小肠和大肠的内容物具有流体稠度，肠粘膜没有肉眼可见的病变（Segalesetal2017）。个别感染案例还可见浆液纤维素性腹膜炎、心包炎，局部广泛性空肠炎和局灶性胃溃疡（花群俊等2019；Alaisetal2017）。猪SVV感染后第3至7天，淋巴结、脾脏、扁桃体出现淋巴样增生、肺脏膨胀不全，并伴有弥漫性充血（Joshietal2016）。1.6塞内卡谷病毒的防控措施当前还没有塞内卡病的有效疫苗，也没有针对该病的有效治疗手段。一些学者通过反向遗传学构建了克隆的KS15-01菌株的载体pKS15-01-克隆，为SVV疫苗的应用开发提供了坚实的物质基础（ZhenHCetal2016）。与此同时，中国学者首次通过BHK21细胞旋转瓶培养了CH-FJZZ-2017病毒株，缩水甘油醛灭活剂灭活后，用油乳化佐剂乳化并以每只动物2g的剂量免疫，可以产生较高滴度的中和抗体（YangFetal2018）。依据当前研究结论可以确定，SVV的危害性可防可控，它的危害性不比口蹄疫病毒造成的结局，基本上感染SVV的大猪，架子猪，成年母猪等恢复良好，不会引起严重的公共卫生后果和经济损失，但
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪A型塞内卡病毒研究进展[J]. 花群俊,林彦星,杨仕标. 云南畜牧兽医. 2019(03)
[2]猪塞内卡病毒研究进展[J]. 黄健强,吴静波. 动物医学进展. 2019(03)
[3]运用液体流动装置模拟的流体剪切应力下骨髓瘤细胞对骨细胞、破骨细胞和骨细胞表达RANKL的影响[J]. 王晓桃,田申,何玉婵,吴春叶,张俊艳,阳少芳,王航飞,You Lidan. 中国组织工程研究. 2019(02)
[4]塞内卡病毒病研究进展[J]. 张永宁,吴绍强,林祥梅. 畜牧兽医学报. 2017(08)
[5]国内首株猪塞内加谷病毒（Seneca Valley virus）的分离鉴定[J]. 赵晓亚,伍绮文,伍子娴,陈桂华,白杨,马静云. 中国预防兽医学报. 2016(11)
[6]参与小RNA病毒感染和复制的宿主及病毒蛋白功能研究进展[J]. 魏衍全,郭慧琛,徐进,孙德惠,孙世琪. 中国人兽共患病学报. 2013(01)
[7]抗原表位的研究进展及其应用[J]. 张伟,余传信. 中国血吸虫病防治杂志. 2012(01)
[8]基于改进的人工神经网络方法预测CTL表位[J]. 刘涛,宋哲,刘伟,王雪颖,邱晓明. 大连理工大学学报. 2007(04)
博士论文
[1]鸡传染性支气管炎病毒Sczy3 S1蛋白中和性单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[D]. 邹年莉.四川农业大学 2015
本文编号：3603388
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
塞内卡谷病毒粒子平面和三维结构(ViralZone2015)
塞内卡谷病毒中和性单克隆抗体制备及中和表位鉴定3图1-2SVV基因组结构（Segalesetal2016）Fig.1-2ThegenomestructureoftheSVV1.2.2.1前导蛋白L塞内卡谷病毒的前导蛋白L全长含99个氨基酸，与同样包含L蛋白的心病毒，肺炎病毒，狂犬病毒，柯布病毒，破骨病毒和细小病毒属别不同。它的蛋白序列缺乏蛋白水解活动所需的催化残基位点，既不含有“锌指”构象基序[C-x-H-x(6)-C-c(2)-C]，也不含有磷酸化酪氨酸基序[K-x(2)-E-x(2)-Y]（黄健强等2019），表明SVV的前导蛋白Ｌ可能具有独特的功能，具体功能尚待确定。1.2.2.2病毒结构蛋白P1病毒结构蛋白P1可以被3C蛋白酶分解为三个亚基蛋白，依次为VP0、VP3和VP1，VP0蛋白成熟之后会分解为VP4蛋白和VP2蛋白，因此结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1是形成病毒衣壳的主要单位，用于病毒衣壳的合成（Halesetal2008）。VP1、VP2和VP3蛋白在病毒结构上形成正三角形，以20个这样的正三角形组装成正20面体，分布于衣壳外表面，剩余的VP4蛋白处于正20面体内表面（ViralZone2015）。有研究显示该三种蛋白亲水性较高，更容易产生抗原表位，病毒侵入机体更容易诱导机体产生中和抗体，从而实现消灭入侵病毒的作用，因而这3种结构蛋白在机体抵御SVV感染过程中发挥关键作用（Maggiolietal2018）。结构蛋白VP1的氨基酸序列比较保守，在SVV不同分离株中同源性比对95.8%至100%，但是与其他小RNA病毒的同源性比较远，所以VP1蛋白可以作为检测对象以区分其他病原体（Gimenez-Lirolaetal2016）。1.2.2.3非结构蛋白P2和P3P2和P3基因组区域主要编码病毒非结构蛋白，参与病毒蛋白质的加工和病毒的复制（Segalesetal2016）。P2基因组可编码三种非结构蛋白2A、2B和2C。其中2A蛋白包含小RNA病毒科病毒的保守基序NPG/P模体作为结尾，但只
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文6图1-3SVV感染的临床症状（Lemeetal2017）Fig.1-3TheclinicalandpathologicoutcomesofSVVinfection1.5塞内卡谷病毒感染猪的病理变化猪感染SVV后死亡，在进行病亡剖检时，发现腹泻的仔猪中有很大一部分表现出皮下或肠系膜水肿，并且大多数仔猪的胃中存留大量母乳（Stevenetal2017）。小肠和大肠的内容物具有流体稠度，肠粘膜没有肉眼可见的病变（Segalesetal2017）。个别感染案例还可见浆液纤维素性腹膜炎、心包炎，局部广泛性空肠炎和局灶性胃溃疡（花群俊等2019；Alaisetal2017）。猪SVV感染后第3至7天，淋巴结、脾脏、扁桃体出现淋巴样增生、肺脏膨胀不全，并伴有弥漫性充血（Joshietal2016）。1.6塞内卡谷病毒的防控措施当前还没有塞内卡病的有效疫苗，也没有针对该病的有效治疗手段。一些学者通过反向遗传学构建了克隆的KS15-01菌株的载体pKS15-01-克隆，为SVV疫苗的应用开发提供了坚实的物质基础（ZhenHCetal2016）。与此同时，中国学者首次通过BHK21细胞旋转瓶培养了CH-FJZZ-2017病毒株，缩水甘油醛灭活剂灭活后，用油乳化佐剂乳化并以每只动物2g的剂量免疫，可以产生较高滴度的中和抗体（YangFetal2018）。依据当前研究结论可以确定，SVV的危害性可防可控，它的危害性不比口蹄疫病毒造成的结局，基本上感染SVV的大猪，架子猪，成年母猪等恢复良好，不会引起严重的公共卫生后果和经济损失，但
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪A型塞内卡病毒研究进展[J]. 花群俊,林彦星,杨仕标. 云南畜牧兽医. 2019(03)
[2]猪塞内卡病毒研究进展[J]. 黄健强,吴静波. 动物医学进展. 2019(03)
[3]运用液体流动装置模拟的流体剪切应力下骨髓瘤细胞对骨细胞、破骨细胞和骨细胞表达RANKL的影响[J]. 王晓桃,田申,何玉婵,吴春叶,张俊艳,阳少芳,王航飞,You Lidan. 中国组织工程研究. 2019(02)
[4]塞内卡病毒病研究进展[J]. 张永宁,吴绍强,林祥梅. 畜牧兽医学报. 2017(08)
[5]国内首株猪塞内加谷病毒（Seneca Valley virus）的分离鉴定[J]. 赵晓亚,伍绮文,伍子娴,陈桂华,白杨,马静云. 中国预防兽医学报. 2016(11)
[6]参与小RNA病毒感染和复制的宿主及病毒蛋白功能研究进展[J]. 魏衍全,郭慧琛,徐进,孙德惠,孙世琪. 中国人兽共患病学报. 2013(01)
[7]抗原表位的研究进展及其应用[J]. 张伟,余传信. 中国血吸虫病防治杂志. 2012(01)
[8]基于改进的人工神经网络方法预测CTL表位[J]. 刘涛,宋哲,刘伟,王雪颖,邱晓明. 大连理工大学学报. 2007(04)
博士论文
[1]鸡传染性支气管炎病毒Sczy3 S1蛋白中和性单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[D]. 邹年莉.四川农业大学 2015
本文编号：3603388
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