miR-150调控Notch3/FAK/ERK1/2信号通路抑制人脂肪干细胞成骨分化
发布时间：2022-02-15 09:27
目的:本研究用腺病毒或慢病毒感染人脂肪干细胞,通过细胞培养、Real-timePCR、免疫荧光和Western blotting等实验方法证明miR-150通过靶向调控Notch3/FAK/ERK1/2负向调控人脂肪干细胞（hADSCs）的成骨分化。为骨损伤骨缺损等治疗提供新的思路。研究方法:1.体外条件下,培养人脂肪干细胞,将三组细胞:N组,GFP组,miR-150组于六孔板中培养。用过表达miR-150的腺病毒感染hADSCs。Realtime-PCR检测miR-150的表达;Western blotting检测Notch3的表达水平。Western blotting检测FAK、pFAK、ERK1/2、pERK1/2、ROHA等成骨信号通路相关蛋白。用免疫荧光检测FAK、pFAK、ERK1/2、pERK1/2、RhoA、F-actin的蛋白表达。CCK8检测miR-150对hADSCs增殖的影响。2.将四组细胞:GFP组,Notch3-siR1组,Notch3-siR2,Notch3-siR3组于六孔板中培养。用敲除Notch3的慢病毒感染hADSCs。Western blotti...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
过表达miR-150的hADSCs的构建标尺示100μm2A2B2C
中国医科大学硕士学位论文16活性低于N组和GFP组。ALP染色结果所示，同N组和GFP组比较，miR-150组ALP染色强度减弱。（图5、6、7）5ANN+OMGFP+OMmiR-150+OM0.00.51.01.52.02.5RelativelevelsofRUNX-2(normalizedtoGAPDH)*#5B图5hADSCs成骨诱导7天RUNX-2表达A.RUNX-2在hADSCs中的表达情况；B.统计学分析，与N组相比，*P<0.05;统计学分析，与GFP+OM组相比，#P<0.05NN+OMGFP+OMmiR-150+OM0123**#ALPactivity图6hADSCs成骨诱导7天ALP表达统计学分析，与N组相比，**P<0.01;统计学分析，与GFP+OM组相比，#P<0.05图7hADSCs成骨诱导7天ALP染色，标尺示50μmNGFPmiR-1507A7B7C7DOM36KD56KDGAPDHRUNX-2－＋＋＋50μm
中国医科大学硕士学位论文20统计学结果分析，与N组相比，***P<0.001;统计学结果分析，对比着control+OM组，##P<0.01图12hADSCs成骨诱导7天ALP染色，标尺示50μmA.N组ALP染色结果；B.N+OM组ALP染色结果；C.control+OM组ALP染色结果;D.miR-150inhibitor+OM组ALP染色结果3.3.2抑制miR-150表达后检测相关蛋白在hADSCs的表达检测Notch3、pFAK、FAK、pERK1/2、ERK、RhoA在hADSCs中的表达，结果显示，miR-150inhibitor组hADSCs的Notch3、pFAK、pERK1/2、RhoA蛋白的表达量明显高于N组和control组。FAK、ERK与对照组相比无差别。（图13）13A12A12B12C12D50μmNcontrolmiR-150inhibitorNotch3pFAKFAKERK1/2pERK1/2RhoAGAPDH280KD125KD125KD44KD44KD21KD36KD
【参考文献】：
期刊论文
[1]骨形成蛋白-2基因活化纳米骨浆促进脊柱椎体间融合的作用[J]. 丁一,赵伟峰,李波,周焯家,郭涛,简月奎. 中国老年学杂志. 2020(03)
[2]Adipose stromal/stem cells in regenerative medicine:Potentials and limitations[J]. Leandra Santos Baptista. World Journal of Stem Cells. 2020(01)
[3]miR-150在骨髓间充质干细胞分化中的作用及其可能的机制[J]. 郭伟壮,兰涛,杨欣建,田长庆. 黑龙江医学. 2019(10)
[4]微小RNA-29a-3p调节卷曲蛋白4表达影响高脂血症大鼠种植体骨整合的实验研究[J]. 刘飞,王志峰,刘芳芳,徐巾诏,刘奇博,蓝菁. 华西口腔医学杂志. 2019(02)
[5]MicroRNA-26a对人骨髓间充质干细胞成骨分化机制在修复骨缺损研究进展[J]. 冯映栋,魏波,孙永建,王家丰,梁培杰,梁振. 医学信息. 2019(06)
[6]自体骨髓经皮注射移植治疗骨不连和骨延迟愈合的临床应用观察[J]. 刘瑞祥,陈琪,涂江虹,梁海,欧阳阳钢,娄楠,廖家成. 内蒙古医学杂志. 2015(04)
本文编号：3626376
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
过表达miR-150的hADSCs的构建标尺示100μm2A2B2C
中国医科大学硕士学位论文16活性低于N组和GFP组。ALP染色结果所示，同N组和GFP组比较，miR-150组ALP染色强度减弱。（图5、6、7）5ANN+OMGFP+OMmiR-150+OM0.00.51.01.52.02.5RelativelevelsofRUNX-2(normalizedtoGAPDH)*#5B图5hADSCs成骨诱导7天RUNX-2表达A.RUNX-2在hADSCs中的表达情况；B.统计学分析，与N组相比，*P<0.05;统计学分析，与GFP+OM组相比，#P<0.05NN+OMGFP+OMmiR-150+OM0123**#ALPactivity图6hADSCs成骨诱导7天ALP表达统计学分析，与N组相比，**P<0.01;统计学分析，与GFP+OM组相比，#P<0.05图7hADSCs成骨诱导7天ALP染色，标尺示50μmNGFPmiR-1507A7B7C7DOM36KD56KDGAPDHRUNX-2－＋＋＋50μm
中国医科大学硕士学位论文20统计学结果分析，与N组相比，***P<0.001;统计学结果分析，对比着control+OM组，##P<0.01图12hADSCs成骨诱导7天ALP染色，标尺示50μmA.N组ALP染色结果；B.N+OM组ALP染色结果；C.control+OM组ALP染色结果;D.miR-150inhibitor+OM组ALP染色结果3.3.2抑制miR-150表达后检测相关蛋白在hADSCs的表达检测Notch3、pFAK、FAK、pERK1/2、ERK、RhoA在hADSCs中的表达，结果显示，miR-150inhibitor组hADSCs的Notch3、pFAK、pERK1/2、RhoA蛋白的表达量明显高于N组和control组。FAK、ERK与对照组相比无差别。（图13）13A12A12B12C12D50μmNcontrolmiR-150inhibitorNotch3pFAKFAKERK1/2pERK1/2RhoAGAPDH280KD125KD125KD44KD44KD21KD36KD
【参考文献】：
期刊论文
[1]骨形成蛋白-2基因活化纳米骨浆促进脊柱椎体间融合的作用[J]. 丁一,赵伟峰,李波,周焯家,郭涛,简月奎. 中国老年学杂志. 2020(03)
[2]Adipose stromal/stem cells in regenerative medicine:Potentials and limitations[J]. Leandra Santos Baptista. World Journal of Stem Cells. 2020(01)
[3]miR-150在骨髓间充质干细胞分化中的作用及其可能的机制[J]. 郭伟壮,兰涛,杨欣建,田长庆. 黑龙江医学. 2019(10)
[4]微小RNA-29a-3p调节卷曲蛋白4表达影响高脂血症大鼠种植体骨整合的实验研究[J]. 刘飞,王志峰,刘芳芳,徐巾诏,刘奇博,蓝菁. 华西口腔医学杂志. 2019(02)
[5]MicroRNA-26a对人骨髓间充质干细胞成骨分化机制在修复骨缺损研究进展[J]. 冯映栋,魏波,孙永建,王家丰,梁培杰,梁振. 医学信息. 2019(06)
[6]自体骨髓经皮注射移植治疗骨不连和骨延迟愈合的临床应用观察[J]. 刘瑞祥,陈琪,涂江虹,梁海,欧阳阳钢,娄楠,廖家成. 内蒙古医学杂志. 2015(04)
本文编号：3626376
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