遗传补偿效应在人类细胞系中的研究

发布时间：2022-02-21 04:30

　　随着反向遗传学的发展,许多研究发现,一些基因在敲低时有明显表型,但在基因敲除突变体中却没有表型,起初都认为此种现象是由于敲低时脱靶效应所致。2015年,Stainier实验室在斑马鱼中发现这种现象并不是由于脱靶效应造成的,而是由于相关基因仅在敲除突变体中上调所致,他们把此种现象称为遗传补偿效应。2019年,我们实验室利用斑马鱼进一步揭示了遗传补偿效应的分子机制,证明只有无义突变才能激活遗传补偿效应,无义mRNA与Upf3a一起通过提高同源基因的表达来进行补偿效应。此外,抑癌因子p53在DNA损伤反应中扮演着中心角色,50%的人类癌细胞中都发生了p53变异,而这些癌细胞,由于p53突变丧失诱导细胞凋亡的功能,对放化疗极不敏感。我们推测经过放化疗后而存活的p53突变癌细胞中可能会累积许多无义突变,这时遗传补偿效应在这些细胞的存活中起到重要作用。本项研究将探讨人类细胞中是否也存在遗传补偿效应,如果存在,其分子机制与斑马鱼又是否类似;在DNA损伤胁迫下,遗传补偿效应是否会促进p53缺失癌细胞的存活;同时,我们实验室还发现p53缺失细胞对于40℃亚高温处理更加敏感,本项研究将探寻其背后的分子机制... 

【文章来源】：浙江大学浙江省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
第一章 前言
    1.1 无义RNA介导的降解途径(NMD)
        1.1.1 NMD降解机制
        1.1.2 UPF3 蛋白
        1.1.3 NMD的生理功能
        1.1.4 NMD与应激反应
    1.2 遗传补偿效应
        1.2.1 遗传补偿效应的分子机制
    1.3 抑癌基因p53
        1.3.1 p53 的功能
        1.3.2 p53 与癌症治疗
    1.4 热休克反应(HSR)
        1.4.1 热休克因子
        1.4.2 热休克蛋白
        1.4.3 热激同源蛋白70(HSC70)与蛋白质选择性降解
    1.5 本课题研究的背景、内容和目的
第二章 实验材料与方法
    2.1 斑马鱼相关实验
    2.2人类细胞相关实验
    2.3 RNA相关实验
    2.4 蛋白质相关实验
    2.5 DNA相关实验
    2.6 本文中所用化学试剂及相关溶液配方
第三章 人类细胞系中遗传补偿效应的研究
    3.1 FBXO7和COL6A2 基因敲除细胞系的构建
    3.2 FBXO7和COL6A2 基因敲除细胞系中的遗传补偿效应
    3.3 COL6A2~(-/-)细胞系中遗传补偿效应依赖于UPF3A而不依赖于UPF1
    3.4 小结和讨论
第四章 遗传补偿效应与p53突变体在癌症治疗中的研究
    4.1 UPF3A敲除细胞系的获得
    4.2 敲除UPF3A增加p53-/-应对DNA损伤压力的敏感性
    4.3 40 ℃条件下p53 保护细胞存活
    4.4 p53在40℃抑制过度的热休克反应
    4.5 小结和讨论
第五章 总结与讨论
    5.1 总结
    5.2 讨论
参考文献
致谢



本文编号：3636502