猪源枯草芽胞杆菌的筛选与初步应用研究
发布时间：2022-02-22 07:39
抗生素不科学地使用使得细菌耐药性和药物残留等问题日益突出,严重危害养殖业健康发展和人类食品安全,研发安全有效的抗生素的替代品已刻不容缓。枯草芽胞杆菌广泛存在水体、土壤及动物的胃肠道中,具有促进动物营养成分消化吸收、抑菌、调控肠道菌群及提高动物免疫力等作用,且易于分离和培养,已成为饲添抗生素的最佳替代品之一。因此,本研究旨在从猪粪中筛选出优势的枯草芽胞杆菌,并将此株优势菌株应用于动物实验,探讨其益生作用,为枯草芽胞杆菌制剂的开发提供技术支持。主要研究结果如下:1.枯草芽胞杆菌的筛选:从100份猪粪样品中通过热处理的方法得到50株芽胞杆菌,通过显微镜镜检、生理生化试验、PCR鉴定及16S r RNA序列分析,鉴定出25株枯草芽胞杆菌,分别命名为BS-1～BS-25。通过产酶试验及抑菌试验筛选枯草芽胞杆菌优势菌株,产酶试验结果表明:除菌株BS-12、BS-13、BS-14外,其它菌株均能分泌蛋白酶;除菌株BS-11和BS-18外,其它菌株均能分泌纤维素酶;除菌株BS-10外,其它菌株均能分泌淀粉酶;综上,菌株BS-19综合产酶能力最强。抑菌试验结果表明,菌株BS-3、BS-15、BS-19对...
【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
．1益生菌对肠道免疫系统作用（CummingsJH2004）
猪源枯草芽胞杆菌的筛选与初步应用研究23（a）（b）（c）图4-1芽胞杆菌的菌落形态（a）、革兰氏染色（b）、芽胞染色（c）Fig.4-1Colonymorphology(a),Gramstaining(b),Sporestaining（c）ofBacillusspp.4.2枯草芽胞杆菌生理生化检测根据枯草芽胞杆菌分属检索表，将鉴定结果与《伯杰氏细菌鉴定手册》上关于枯草芽胞杆菌的描述相对照（如下表4-1所示），结果与其一致的有25株，初步鉴定为枯草芽胞杆菌，分别命名为BS-1~BS-25。表4-1枯草芽胞杆菌生理生化检测结果Table4-1PhysiologicalandbiochemicalcharacteristicsofBSstrain项目结果项目结果蛋白胨水-阿拉伯糖-尿素+木糖-枸缘酸盐-甘露醇-苯丙氨酸-精氨酸脱羧酶+淀粉-明胶液化+硝酸盐还原+硫化氢-葡磷胨水-棉子糖-注：“-”表示阴性；“+”表示阳性。Note:"-"meansnegative;"+"meanspositive.4.3枯草芽胞杆菌的分子生物学鉴定用特异性引物rpoA基因进行PCR扩增，扩增长度约为250bp，如图4-2所示，与预期片段大小一致；用16SrRNA通用引物进行PCR扩增，大小约为1500bp如图4-3所示，符合枯草芽胞杆菌的预期扩增片段长度。25株疑似菌株经克垄
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文测序和序列分析，将测序结果在NCBI进行Blast比对，与GeneBank数据库中枯草芽胞杆菌同源性高达99.99%，并从NCBI上下载有一定同源关系的菌株序列，用MAGE6.0软件采用邻接法构建进化树如图4-4所示。综上可知，25株疑似菌株为枯草芽胞杆菌。具体测序后的序列以枯草芽胞杆菌BS-19为例，见附表A。图4-2枯草芽胞杆菌特异性引物的PCR扩增产物电泳图Fig.4-2PCRAmplifiedProductswithSpecificPrimersofBacillussubtilis1~25:BS-1~BS-25特异性引物扩增片段；M:DL2000DNAMarker图4-3枯草芽胞杆菌通用引物的PCR扩增产物电泳图Fig.4-3PCRAmplifiedProductswithUniversalPrimerofBacillussubtilis1~3:BS-1~BS-3通用引物扩增片段；M:DL2000DNAMarker
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌微生态制剂发酵研究进展[J]. 杜晓雨,赵恺,赵志敏,赵吉. 微生物学通报. 2020(03)
[2]枯草芽孢杆菌的作用机制及其在动物生产中的应用[J]. 朱瑾,朱红军. 粮食与饲料工业. 2019(08)
[3]枯草芽孢杆菌MX-6的特性研究[J]. 满丽莉,向殿军. 中国调味品. 2019(09)
[4]植物乳杆菌WLPL01艾草发酵液干预鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的作用[J]. 詹晖,田林林,钟常城,何瑶,王谦慧,杨琴,魏华,陶雪莹. 南昌大学学报(理科版). 2019(04)
[5]枯草芽孢杆菌主要作用机制与应用研究进展[J]. 李怡洁,杨佐忠. 四川林业科技. 2019(04)
[6]一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件优化[J]. 袁蕊,王学江,李峰. 化学与生物工程. 2019(07)
[7]枯草芽孢杆菌对肥育猪血浆生化和免疫指标及粪便菌群的影响[J]. 贺长青,朱瑾,匡佑华,陈继发,曲湘勇,郭松长,今林宽和,周学彬. 动物营养学报. 2019(07)
[8]布拉酵母菌对轮状病毒性胃肠炎患儿临床症状及血清IL-10、CD8+的影响[J]. 王宽锋,屈晖,钟红平,王翠翠,任华. 贵州医药. 2019(06)
[9]枯草芽孢杆菌在养猪生产中的应用研究进展[J]. 曹阳. 中国畜牧杂志. 2019(09)
[10]枯草芽孢杆菌替代抗生素治疗鸡白痢试验[J]. 段会勇,孟秀彦,张清林. 现代畜牧科技. 2019(06)
硕士论文
[1]饲粮中添加枯草芽孢杆菌和粪肠球菌对水貂生产性能、消化代谢及免疫功能的影响[D]. 乜豪.中国农业科学院 2018
[2]枯草芽孢杆菌J-4菌株对雏鸡免疫功能的影响[D]. 杨曦.河北农业大学 2014
本文编号：3638998
【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
．1益生菌对肠道免疫系统作用（CummingsJH2004）
猪源枯草芽胞杆菌的筛选与初步应用研究23（a）（b）（c）图4-1芽胞杆菌的菌落形态（a）、革兰氏染色（b）、芽胞染色（c）Fig.4-1Colonymorphology(a),Gramstaining(b),Sporestaining（c）ofBacillusspp.4.2枯草芽胞杆菌生理生化检测根据枯草芽胞杆菌分属检索表，将鉴定结果与《伯杰氏细菌鉴定手册》上关于枯草芽胞杆菌的描述相对照（如下表4-1所示），结果与其一致的有25株，初步鉴定为枯草芽胞杆菌，分别命名为BS-1~BS-25。表4-1枯草芽胞杆菌生理生化检测结果Table4-1PhysiologicalandbiochemicalcharacteristicsofBSstrain项目结果项目结果蛋白胨水-阿拉伯糖-尿素+木糖-枸缘酸盐-甘露醇-苯丙氨酸-精氨酸脱羧酶+淀粉-明胶液化+硝酸盐还原+硫化氢-葡磷胨水-棉子糖-注：“-”表示阴性；“+”表示阳性。Note:"-"meansnegative;"+"meanspositive.4.3枯草芽胞杆菌的分子生物学鉴定用特异性引物rpoA基因进行PCR扩增，扩增长度约为250bp，如图4-2所示，与预期片段大小一致；用16SrRNA通用引物进行PCR扩增，大小约为1500bp如图4-3所示，符合枯草芽胞杆菌的预期扩增片段长度。25株疑似菌株经克垄
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文测序和序列分析，将测序结果在NCBI进行Blast比对，与GeneBank数据库中枯草芽胞杆菌同源性高达99.99%，并从NCBI上下载有一定同源关系的菌株序列，用MAGE6.0软件采用邻接法构建进化树如图4-4所示。综上可知，25株疑似菌株为枯草芽胞杆菌。具体测序后的序列以枯草芽胞杆菌BS-19为例，见附表A。图4-2枯草芽胞杆菌特异性引物的PCR扩增产物电泳图Fig.4-2PCRAmplifiedProductswithSpecificPrimersofBacillussubtilis1~25:BS-1~BS-25特异性引物扩增片段；M:DL2000DNAMarker图4-3枯草芽胞杆菌通用引物的PCR扩增产物电泳图Fig.4-3PCRAmplifiedProductswithUniversalPrimerofBacillussubtilis1~3:BS-1~BS-3通用引物扩增片段；M:DL2000DNAMarker
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌微生态制剂发酵研究进展[J]. 杜晓雨,赵恺,赵志敏,赵吉. 微生物学通报. 2020(03)
[2]枯草芽孢杆菌的作用机制及其在动物生产中的应用[J]. 朱瑾,朱红军. 粮食与饲料工业. 2019(08)
[3]枯草芽孢杆菌MX-6的特性研究[J]. 满丽莉,向殿军. 中国调味品. 2019(09)
[4]植物乳杆菌WLPL01艾草发酵液干预鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的作用[J]. 詹晖,田林林,钟常城,何瑶,王谦慧,杨琴,魏华,陶雪莹. 南昌大学学报(理科版). 2019(04)
[5]枯草芽孢杆菌主要作用机制与应用研究进展[J]. 李怡洁,杨佐忠. 四川林业科技. 2019(04)
[6]一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件优化[J]. 袁蕊,王学江,李峰. 化学与生物工程. 2019(07)
[7]枯草芽孢杆菌对肥育猪血浆生化和免疫指标及粪便菌群的影响[J]. 贺长青,朱瑾,匡佑华,陈继发,曲湘勇,郭松长,今林宽和,周学彬. 动物营养学报. 2019(07)
[8]布拉酵母菌对轮状病毒性胃肠炎患儿临床症状及血清IL-10、CD8+的影响[J]. 王宽锋,屈晖,钟红平,王翠翠,任华. 贵州医药. 2019(06)
[9]枯草芽孢杆菌在养猪生产中的应用研究进展[J]. 曹阳. 中国畜牧杂志. 2019(09)
[10]枯草芽孢杆菌替代抗生素治疗鸡白痢试验[J]. 段会勇,孟秀彦,张清林. 现代畜牧科技. 2019(06)
硕士论文
[1]饲粮中添加枯草芽孢杆菌和粪肠球菌对水貂生产性能、消化代谢及免疫功能的影响[D]. 乜豪.中国农业科学院 2018
[2]枯草芽孢杆菌J-4菌株对雏鸡免疫功能的影响[D]. 杨曦.河北农业大学 2014
本文编号：3638998
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3638998.html
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