利用一步克隆方法快速高效构建Gateway入门载体

发布时间：2022-02-22 16:40

　　Gateway技术是一种非常便捷的载体构建方法,但目前构建入门克隆的方法成本较高,且存在一定的局限性.利用限制酶EcoRⅠ对pCR8-AtS5H入门克隆进行单酶切,获得入门载体pCR8片段,然后利用不依赖序列和连接的一步克隆方法（one-step sequence-and ligation-independent cloning,One-SLIC）将纯化后水稻异分支酸合成酶基因的启动子（ICS1pro）片段连接至pCR8入门载体,并通过菌落PCR和测序方法鉴定得到阳性入门克隆,最后通过LR重组反应将ICS1pro片段转移至Gateway目的载体pMDC163上.这种利用One-SLIC法快速高效构建入门克隆的方法操作简便,成功率高且成本低,是一种具有广泛应用前景的Gateway入门载体构建方法. 

【文章来源】：浙江师范大学学报(自然科学版). 2020,43(01)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材 料
    1.2 方 法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 ICS1pro片段的扩增与纯化
        1.2.3 pCR8片段的获得
        1.2.4 pCR8-ICS1pro质粒的构建
        1.2.5 pCR8-ICS1pro质粒的菌落PCR验证和测序
        1.2.6 LR重组反应
        1.2.7 pMDC163-ICS1pro质粒的菌落PCR验证和测序
2 结果与讨论
    2.1 ICS1pro片段扩增
    2.2 pCR8片段的获得
    2.3 pCR8-ICS1pro入门克隆的构建
    2.4 pMDC163-ICS1pro目标载体的构建
3 讨 论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3639841