鸭肠炎病毒（DEV）诱导鸭胚成纤维细胞（DEF）内质网应激介导的自噬和凋亡及相关机制研究

发布时间：2022-07-03 13:34

　　鸭病毒性肠炎（Duck virus enteritis,DVE）,又称鸭瘟（Duck plague,DP）,是由鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）引起的鸭,鹅等禽类的一种急性、接触性传染病。其特征是死亡率高,给养鸭业带来巨大的经济损失。DEV又称鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）,属于疱疹病毒科。近年来,有研究表明DEV可以引起鸭胚成纤维（Duck embryo fibroblast,DEF）细胞自噬。且高感染性病毒可以通过影响细胞内Ca²⁺失衡,导致DEF细胞死亡。此外,DEV可通过内质网应激相关的未折叠蛋白的反应诱导自噬。目前,人们把研究的焦点集中于DEV分子生物学,对于相关细胞感染DEV后细胞功能及相关机制研究较少。本研究以自噬和内质网应激为研究对象,探讨DEV诱导DEF内质网应激介导的细胞自噬和凋亡以及相关机制研究,为阐明DEV感染DEF机理提供相关理论基础,为鸭瘟的预防与控制提供相关思路。主要研究内容如下:1.不同感染复数（Multiplicity of infection,MOI）的DEV对DEF增殖和凋... 

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略词
文献综述
第一章 鸭肠炎病毒对鸭胚成纤维细胞增殖和凋亡的影响
    1 材料
        1.1 实验鸭胚
        1.2 病毒和细胞
        1.3 主要试剂
        1.4 主要仪器
        1.5 主要溶液的配置
    2 方法
        2.1 DEF制备
        2.2 DEF感染DEV实验
        2.3 细胞传代
        2.4 CCK8试剂盒细胞增殖检测
        2.5 流式细胞术细胞凋亡检测
        2.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的DEV-GZ对DEF活力的影响
        3.2 不同MOI的DEV-GZ对DEF凋亡的影响
    4 讨论
第二章 DEF感染DEV后,细胞内Ca~(2+)、自噬及内质网应激相关蛋白表达的影响
    1 材料
        1.1 病毒和细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 常用溶液配制
    2 方法
        2.1 DEF制备
        2.2 DEF感染DEV实验
        2.3 细胞传代
        2.4 荧光显微镜检测细胞内钙离子
        2.5 Western Blot检测相关蛋白
            2.5.1 细胞总蛋白提取
            2.5.2 蛋白含量测定
            2.5.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
            2.5.4 转模
            2.5.5 免疫杂交反应
        2.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 不同MOI的DEV-GZ对DEF中钙离子的影响
        3.2 不同MOI的DEV-GZ对DEF中自噬蛋白水平的影响
        3.3 不同MOI的DEV-GZ对DEF中内质网应激相关蛋白水平的影响
    4 讨论
第三章 Ca~(2+)螯合剂逆转DEV对DEF感染作用
    1 材料
        1.1 病毒和细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2 方法
        2.1 DEF制备
        2.2 DEF感染DEV实验
        2.3 钙离子螯合剂处理细胞
        2.4 荧光显微镜检测细胞内钙离子
        2.5 CCK8试剂盒细胞增殖检测
        2.6 流式细胞术检测细胞凋亡水平
        2.7 Western Blot检测自噬相关蛋白
            2.7.1 细胞总蛋白提取
            2.7.2 蛋白含量测定
            2.7.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
            2.7.4 转模
            2.7.5 免疫杂交反应
        2.8 统计学分析
    3 结果
        3.1 Ca~(2+)螯合剂对DEV-GZ介导的DEF钙离子水平的影响
        3.2 Ca~(2+)螯合剂对DEV-GZ介导的DEF增殖活力的影响
        3.3 Ca~(2+)螯合剂对DEV-GZ介导的DEF凋亡能力的影响
        3.4 Ca~(2+)螯合剂对DEV-GZ介导的DEF自噬的影响
        3.5 Ca~(2+)螯合剂对DEV-GZ介导的DEF内质网应激相关蛋白表达的影响
    4 讨论
全文结论
参考文献
附录 攻读硕士学位期间发表论文情况
致谢



本文编号：3654953