日本七鳃鳗L-STAT3的克隆及体内外表达分析

发布时间：2022-10-30 20:25

　　作为信号转导和转录激活子（STAT）蛋白家族的成员之一,信号转导和转录激活因子3（STAT3）在细胞分化、免疫等众多过程都发挥着重要的作用。该研究在克隆获得日本七鳃鳗STAT3全长的基础上,对其氨基酸序列与其他物种来源的STAT3氨基酸序列进行了同源性比对,将日本七鳃鳗STAT3命名为L-STAT3。对L-STAT3基因分别进行了原核和真核表达,其中原核表达呈包涵体形式存在。根据毕赤酵母密码子偏好性将L-STAT3核苷酸序列进行了密码子优化,实现了L-STAT3在毕赤酵母中的分泌型表达。进一步在转录和蛋白质水平检测了L-STAT3基因在七鳃鳗不同组织中的表达情况。该研究构建了适用于日本七鳃鳗功能基因表达的毕赤酵母表达系统,为后续验证基因功能奠定了基础。对于七鳃鳗L-STAT3基因表达模式的分析可为研究七鳃鳗适应性免疫系统发育和调控的过程提供理论基础。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与培养基
        1.1.1 材料
        1.1.2 培养基
            (1)YPD(又称YEPD)培养基包括:
            (2)BMGY/BMMY培养基基础配方包括:
    1.2 日本七鳃鳗全长基因的克隆、同源性比对及进化分析
    1.3 L-STAT3的原核表达
    1.4 L-STAT3毕赤酵母真核表达
        1.4.1 L-STAT3氨基酸序列的优化及连接pPICZαA载体
        1.4.2 L-STAT3毕赤酵母表达体系的优化
    1.5 毕赤酵母表达L-STAT3的鉴定
    1.6 L-STAT3基因的表达模式分析
2 结果
    2.1 日本七鳃鳗L-STAT3基因全长的克隆及表达
    2.2 L-STAT3的原核表达
    2.3 L-STAT3的真核表达
    2.4 L-STAT3基因的体内表达分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]毕赤酵母外源蛋白分泌途径的研究进展[J]. 刘冰,黄志强,郑潇,张建国.  微生物学杂志. 2019(04)
[2]新型重组毕赤酵母产人胰岛素前体的表达工艺研究[J]. 彭强强,刘启,徐名强,张元兴,蔡孟浩.  中国生物工程杂志. 2019(07)
[3]密码子优化后的αB-晶状体蛋白基因毕赤酵母重组质粒的构建及表达的初步研究[J]. 冯雪,高香,牛纯青,刘堰.  中国生物工程杂志. 2017(07)
[4]米根霉脂肪酶基因pro-ROL和m-ROL在毕赤酵母中的密码子优化、表达和酶学性质的比较分析（英文）[J]. 杨江科,严翔翔,黄日波,张搏.  生物工程学报. 2011(12)



本文编号：3699425