浮萍原生质体瞬时表达体系的建立及其应用研究

发布时间：2022-11-10 18:23

　　【目的】建立浮萍原生质体瞬时表达体系,以加快浮萍生物反应器工程的开发进程。【方法】采用酶解法制备浮萍原生质体,通过对愈伤组织类型、渗透压、预处理方法等一系列参数的优化调整,建立了浮萍原生质体制备方法。利用农杆菌介导外源基因进入浮萍愈伤组织,并制备原生质体观察瞬时表达情况,通过对农杆菌种类、菌浓度、乙酰丁香酮浓度及共培养时间等参数进行调整,筛选最佳的浸染条件。最后利用该瞬时表达体系进行亚细胞定位研究和启动子功能验证。【结果】原生质体制备的最佳条件为:以4℃过夜培养的浮萍悬浮培养愈伤组织为制备材料,用酶液（2%纤维素酶、0.5%离析酶、0.5%果胶酶、0.1 mol/L CaCl₂、0.2 mol/L KCl、1%BSA、20 mmol/L MES pH 5.8、0.5 mol/L甘露醇）于25℃避光消化16 h（40 r/min）;农杆菌浸染最佳条件为:农杆菌GV301在菌浓度(OD₆₀₀)为1、乙酰丁香酮浓度为100μmol/L时,浸染悬浮培养愈伤有最大转化率。【结论】成功建立了浮萍原生质体瞬时表达体系,并证明其可用于亚细胞定位和启动子功能验... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 试剂
    1.3 方法
        1.3.1 拟南芥基因扩增
        1.3.2 载体构建
        1.3.3 原生质体产率测定
        1.3.4 原生质体活性测定
        1.3.5 浮萍原生质体制备参数优化
        1.3.6 农杆菌浸染参数优化
        1.3.7 浮萍原生质体亚细胞定位
        1.3.8 启动子功能检测
2 结果与分析
    2.1 材料类型对原生质体制备产率和活性的影响
    2.2 渗透压浓度对原生质体制备产率和活性的影响
    2.3 预处理方法对原生质体制备产率和活性的影响
    2.4 农杆菌浸染参数对转化率的影响
    2.5 亚细胞定位
    2.6 启动子功能检测
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]浮萍遗传转化体系的建立和优化[J]. 武凤洁,朱晔荣,姬晓櫞,杨琳,刘苗苗,李亚辉,白艳玲,王勇.  生物学通报. 2017(01)
[2]浮萍研究进展[J]. 黄明星,朱思思,张秋鸿.  生物学杂志. 2016(03)
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[4]基于绿色荧光蛋白瞬时表达的植物亚细胞定位方法[J]. 于一帆,朱小彬,葛会敏,陈云.  江苏农业科学. 2014(12)
[5]棉花叶肉原生质体分离及目标基因瞬时表达体系的建立[J]. 李妮娜,丁林云,张志远,郭旺珍.  作物学报. 2014(02)
[6]浮萍相关研究的几方面重要进展[J]. 朱晔荣,马荣,刘清岱,戎清清,杨琳,王勇.  生物学通报. 2010(04)
[7]两个拟南芥未知功能蛋白的亚细胞定位研究[J]. 崔永兰,王鹏程.  武汉植物学研究. 2009(02)
[8]植物蛋白质的亚细胞定位研究进展[J]. 邢浩然,刘丽娟,刘国振.  华北农学报. 2006(S2)
[9]PEG介导原生质体转化获得水稻转基因植株[J]. 李文彬,孙勇如,王革娇,SalaF,StanchinaE,Castiglione.  植物学报. 1995(05)
[10]用FDA-PI双色荧光法鉴定大麦原生质体活性[J]. 黄纯农.  细胞生物学杂志. 1988(03)

硕士论文
[1]PEG介导玉米叶肉细胞原生质体瞬时基因转化体系的应用研究[D]. 张龄丹.安徽农业大学 2016



本文编号：3705086