定点突变提高木聚糖酶Umxyn10A的热稳定性

发布时间：2023-02-15 19:51

　　木聚糖酶是微生物半纤维素降解体系中的一种关键酶,被广泛地应用在工业中的多个领域。本研究为了提高木聚糖酶Umxyn10A (ABL73-883.1)的热稳定性,将Umxyn10A与GH 10家族4种耐热木聚糖酶进行多序列同源比对以及三维结构的同源建模分析,选定了Umxyn10A第31位氨基酸位点进行定点突变,将氨基酸Ala (A)突变为Phe (F)。分别将Umxyn10A和Umxyn10A^A31F在大肠杆菌中进行重组表达,分析2种重组酶的酶学特性,结果发现,Umxyn10A^A31F的最适反应温度为85℃,较野生重组酶提高了5℃;在65℃下的半衰期为105 min,较野生重组酶(15 min)提高了6倍;在70℃下突变重组酶的半衰期为15 min,较野生重组酶(5 min)提高了2倍;与此同时突变重组酶的pH耐受区间较原酶也有一定的增大。结果表明,将第31位氨基酸位点Ala突变为Phe能够显著的提高Umxyn10A的热稳定性。

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【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 突变位点的选择
    1.2 重组表达质粒的构建
    1.3 木聚糖酶Umxyn10AA31F的重组表达与纯化
    1.4 重组木聚糖酶Umxyn10AA31F温度特性
    1.5 木聚糖酶Umxyn10AA31F的pH特性
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 菌株、质粒和培养基
    3.2 主要试剂
    3.3 定点突变位点的选择
    3.4 重组表达质粒的构建
    3.5 重组木聚糖酶基因的诱导表达与纯化
    3.6 木聚糖酶酶活的测定
    3.7 温度对木聚糖酶活性的影响
    3.8 p H对木聚糖酶酶活性的影响



本文编号：3743738