内蒙古查干诺尔盐碱湖可培养嗜盐古菌多样性及氨肽酶研究

发布时间：2023-03-19 04:33

　　我国盐湖资源丰富,蕴藏着大量的嗜盐古菌。内蒙古高原得益于独特的气候,盐湖数目居全国首位,其中包含众多的盐碱湖。本文主要研究内蒙古查干诺尔盐碱湖可培养嗜盐古菌多样性,发掘新的嗜盐古菌资源,采用多相分类学方法确定分类学地位;从嗜盐古菌基因组中筛选出氨肽酶基因,进一步开展嗜盐古菌氨肽酶的异源表达和酶学性质研究,希望为食品加工用酶制剂的开发和利用提供科学依据。从内蒙古查干诺尔盐碱湖土壤中分离到89株嗜盐古菌。基于16S rRNA基因的系统发育分析表明,这些菌株分属于Natronococcus、Natronorubrum、Halovivax、Halovarius、Halalkalicoccus、CGA53、CGA73和CG73等8个属的15个分类单元,其中包含3个潜在的新的属级分类单元和8个潜在的新的种级分类单元,优势类群为Halalkalicoccus tibetensis。基于16S rRNA基因、rpoB′基因以及直系同源基因的系统发育、表型特征、细胞化学组分、基因组分析结果表明,菌株CGA30代表Halovivax属的一个新种(Halovivax salinus sp.nov.),菌株C...

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 嗜盐古菌
        1.1.1 嗜盐古菌的发现
        1.1.2 嗜盐古菌特征
        1.1.3 嗜盐古菌应用
    1.2 内蒙古地区盐湖嗜盐古菌资源
        1.2.1 我国盐湖分布
        1.2.2 内蒙古盐湖分布
        1.2.3 内蒙古查干诺尔盐碱湖
        1.2.4 内蒙古地区嗜盐古菌资源开发
    1.3 氨肽酶
        1.3.1 氨肽酶定义
        1.3.2 氨肽酶的来源与分类
        1.3.3 正四面体十二聚体氨肽酶(TET)
        1.3.4 氨肽酶在食品工业中的应用
    1.4 嗜盐古菌氨肽酶
        1.4.1 嗜盐古菌酶
        1.4.2 嗜盐古菌氨肽酶研究进展
    1.5 立题依据与研究意义
    1.6 主要研究内容
第二章 查干诺尔盐碱湖可培养嗜盐古菌多样性研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 主要实验仪器与设备
        2.1.2 样品采集
        2.1.3 盐环境参数测定
        2.1.4 菌株分离与培养
        2.1.5 嗜盐古菌鉴定
        2.1.6 基于16S rRNA基因的系统发育分析
        2.1.7 可培养嗜盐古菌多样性分析
    2.2 结果与讨论
        2.2.1 查干诺尔盐碱湖环境信息
        2.2.2 查干诺尔盐碱湖可培养嗜盐古菌菌株
        2.2.3 查干诺尔盐碱湖可培养嗜盐古菌16S rRNA基因及系统发育分析
        2.2.4 查干诺尔盐碱湖可培养嗜盐古菌多样性
    2.3 本章小结
第三章 查干诺尔盐碱湖嗜盐古菌新类群多相分类学研究
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验仪器与设备
        3.1.2 培养基
        3.1.3 基因型分析
        3.1.4 嗜盐古菌的表型特征分析
        3.1.5 嗜盐古菌极性脂组分鉴定
        3.1.6 全基因组测序及分析
    3.2 结果与讨论
        3.2.1 菌株CGA30的多相分类学研究
        3.2.2 菌株CGA73的多相分类学研究
    3.3 本章小结
第四章 嗜盐古菌氨肽酶基因的异源表达与酶学性质表征
    4.1 材料与方法
        4.1.1 菌株
        4.1.2 质粒
        4.1.3 引物
        4.1.4 主要仪器与设备
        4.1.5 主要试剂和培养基
        4.1.6 主要溶液的配制
        4.1.7 嗜盐古菌氨肽酶基因分析
        4.1.8 构建质粒
        4.1.9 嗜盐古菌转化
        4.1.10 嗜盐古菌氨肽酶的纯化
        4.1.11 SDS-PAGE验证
        4.1.12 嗜盐古菌氨肽酶质谱检测
        4.1.13 嗜盐古菌氨肽酶酶活测定及酶学性质研究
        4.1.14 数据分析
    4.2 结果与讨论
        4.2.1 编码嗜盐古菌氨肽酶基因分析
        4.2.2 嗜盐古菌氨肽酶基因的异源表达、纯化及质谱检测
        4.2.3 酶学性质研究
    4.3 本章小结
第五章 主要结论和展望
    5.1 主要结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
在学期间发表的学术论文及其他科研成果



本文编号：3764564