Cre-loxP系统及其衍生系统方法学的研究和在神经科学中的应用

发布时间：2023-03-25 01:41

　　科研中经常需要在模式生物的特定部位或特定类型细胞内敲入、敲除、敲低或过表达特定的基因以实现对实验自变量的精确调控,这时就需要利用各种转基因小鼠。环化重组酶(cyclization recombinase, Cre)可在无任何辅助因子的作用下与不同形式的loxP (locus X over P1) DNA序列直接结合并相互作用,从而可在特定靶点进行特定基因的敲入、敲除等,具有作用原理简单、空间特异性高、重组效率高等优点而被广泛应用。在Cre-loxP系统基础上衍生出的CreERT2系统(Cre与雌激素受体配体结合域的融合蛋白突变体)以及四环素(tetracycline, Tet)-on/off系统可在空间特异性的基础上补充时间特异性,从而可以使目的基因在特定时间、特定空间发生重组。这种时间、空间的双重特异性在减少对实验动物影响的基础上对于如恐惧记忆、印迹细胞等方面的研究不可或缺,具有广阔的应用前景。

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【文章目录】：
1 Cre-lox P系统的组成元件
    1.1 Cre
    1.2 Lox P序列
    1.3 Cre与lox P序列的相互作用
2 Cre-lox P系统在小鼠体内的构建
    2.1 Cre、lox P纯合小鼠杂交
        2.1.1构建lox P纯合小鼠
        2.1.2 构建Cre纯合小鼠
        2.1.3 杂交
    2.2 Cre小鼠与工具病毒
    2.3 Lox P小鼠与工具病毒
    2.4 Cre与lox P工具病毒
3 Cre-lox P系统的衍生系统
    3.1 Cre ERT2系统
    3.2 Tet-on/off系统
        3.2.1 Tet-off系统(无Tet、Dox时目的基因表达)
        3.2.2 Tet-on系统(有Tet、Dox时目的基因表达)
4 应用举例
    4.1 神经精神药物研究
    4.2 睡眠觉醒
    4.3 社会行为
    4.4 恐惧记忆
5 总结与展望



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