大鼠结肠平滑肌细胞原代培养方法简化研究

发布时间：2023-03-28 11:29

　　目的:提高大鼠原代结肠平滑肌细胞(CSMCs)培养方法的实用性及操作性。方法:结肠平滑肌剪碎,37℃0. 25%胰蛋白酶消化30 min,离心,25%胎牛血清(FBS)原代培养,20%FBS传代培养,免疫组织化学法鉴定。结果:原代培养第3天结肠平滑肌细胞贴壁生长及组织块周围细胞游离并生长,第7天生长密集,第9天细胞生长"峰-谷"状。传代培养第2天细胞贴壁,第7天见CSMCs增殖明显,第9天细胞平行生长,呈"峰-谷"状。对第3代CSMCs复苏后第2天少许细胞开始贴壁生长;第8天细胞增殖明显;第14天可见细胞呈亚融合状态。免疫组化鉴定CSMCs胞质为棕黄色,见与细胞长轴平行的α-肌动蛋白纤维细丝,阳性表达的细胞达95%以上。结论:CSMCs简化培养,操作简单易行,值得推广。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 主要实验试剂
        1.1.3 主要实验仪器
    1.2 工作液配制
    1.3 方法
        1.3.1 结肠取材及平滑肌分离
        1.3.2 CSMCs原代培养
        1.3.3 CSMCs传代培养
        1.3.4 未完全解离的结肠平滑肌继续培养
        1.3.5 CSMCs免疫组化细胞鉴定
        1.3.6 细胞冻存与复苏
2 结果
    2.1 CSMCs培养结果
        2.1.1 原代培养
        2.1.2 传代培养
        2.1.3 复苏培养
    2.2 CSMCs免疫组化鉴定传代细胞（2代）结果
    2.3 CSMCs原代细胞培养中的细胞污染
3 讨论
    3.1 简化培养步骤，提高方法的实用性及可操作性
    3.2 全程严格无菌操作
    3.3 结肠平滑肌精准取材及有效清除肠内容物是细胞培养成功的关键
    3.4 适合的细胞培养方法是结肠平滑肌细胞培养成功的保证
    3.5 创新性对其未解离的结肠平滑肌组织块进行原代培养



本文编号：3772883