丹东蒲公英TaWRKY14转录因子克隆及表达分析

发布时间：2023-04-03 02:00

　　植物在生长发育过程中会遭遇各种逆境,WRKY转录因子家族在这其中几乎都有参与,本研究以丹东蒲公英(Taraxacum antungense Kitag.)为试验材料,研究了两种非生物胁迫,两种激素诱导后四种苯丙烷代谢途径中关键酶基因相对表达量的变化,克隆了一名WRKY转录因子家族成员,对其进行研究,试验结果如下:1.在丹东蒲公英中成功克隆得到了WRKY转录因子家族一名成员并命名为TaWRKY14(基因登录号:MH513939),TaWRKY14转录因子,全长1056 bp,编码351个氨基酸。TaWRKY14氨基酸序列的保守结构域与拟南芥AtWRKY14的相同。系统发育树结果显示TaWRKY14是WRKY IIe亚族基因,其亲缘关系最接近的是丹参中的WRKY40。2.利用qRT-PCR对TaWRKY14表达模式进行分析,对丹东蒲公英根、叶柄、叶、花中的WRKY14进行组织特异性分析,结果表明WRKY14在丹东蒲公英根中含量最多,根>叶>叶柄>花,以叶中基因相对表达量视作1,根中的相对表达量高达4.8倍,其次是花和叶柄,在叶柄中表达量为0.65倍。根内TaWRKY14基...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 蒲公英本草与现代研究
    1.2 转录因子及转录因子家族
        1.2.1 WRKY转录因子家族的发现
        1.2.2 WRKY转录因子家族结构
        1.2.3 WRKY转录因子家族功能
        1.2.4 WRKY转录因子在生物胁迫中的作用
        1.2.5 WRKY转录因子在非生物胁迫中的作用
    1.3 外源诱导对植物次生代谢的影响
        1.3.1 非生物胁迫
        1.3.2 生物胁迫
        1.3.3 外源激素处理
    1.4 苯丙烷代谢途径中的相关蛋白酶
    1.5 本试验目的和意义
    1.6 本文技术路线图
2 丹东蒲公英TaWRKY14 转录因子克隆及分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 试验方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 TaWRKY14 目的基因扩增结果
        2.2.2 重组pMD19-T-TaWRKY14 菌液PCR鉴定结果
        2.2.3 系统发育树分析
        2.2.4 氨基酸序列比对分析
    2.3 小结
3 丹东蒲公英TaWRKY14 的表达分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 试验方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 TaWRKY14 基因的组织特异性分析
        3.2.2 盐处理下TaWRKY14 基因相对表达量变化分析
        3.2.3 干旱处理下TaWRKY14 基因相对表达量变化分析
        3.2.4 水杨酸处理下TaWRKY14 基因相对表达量变化分析
        3.2.5 茉莉酸甲酯处理下TaWRKY14 基因相对表达量变化分析
    3.3 小结
4 TaWRKY14 调控苯丙烷代谢途径的表达分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 试验材料
        4.1.2 试验方法
    4.2 结果与分析
        4.2.1 盐处理后丹东蒲公英中绿原酸及咖啡酸的含量变化
        4.2.2 干旱处理后丹东丹东蒲公英中绿原酸及咖啡酸的含量变化
        4.2.3 激素处理后丹东蒲公英中绿原酸及咖啡酸的含量变化
        4.2.4 苯丙烷代谢途径四种蛋白酶的基因相对表达量变化分析
    4.3 小结
5 体外验证TaWRKY14
    5.1 材料与方法
        5.1.1 试验材料
        5.1.2 试验方法
    5.2 结果与分析
        5.2.1 启动子元件分析结果
        5.2.2 酵母单杂交结果
        5.2.3 TaWRKY14 目的基因的扩增
        5.2.4 pMD19-T-TaWRKY14 载体的鉴定
        5.2.5 pET28a-TaWRKY14 载体的鉴定
        5.2.6 IPTG诱导重组TaWRKY14 蛋白表达结果
        5.2.7 亚细胞定位结果分析
    5.3 小结
讨论与结论
参考文献
附录
缩写词表
致谢
攻读学位期间发表文章



本文编号：3780423