错配修复蛋白Tmlh1维持嗜热四膜虫细胞核的稳定性

发布时间：2023-05-31 00:37

　　DNA错配修复(DNA mismatch repair,MMR)蛋白Mlh1和其它因子形成多种不同的复合物,在DNA复制后的MMR途径和减数分裂DNA重组中发挥重要作用。然而对Mlh1的功能并不完全清楚,进一步分析Mlh1在不同进化地位生物中的功能具有重要意义。嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)含有不同的错配修复复合物,基因表达谱分析发现,MutL复合物中的TMLH1(TTHERM₀0127000)在营养生长期和饥饿期低水平表达,在有性生殖减数分裂期表达水平显著上调。免疫荧光定位显示营养生长期,Tmlh1定位于生殖系小核和转录活跃的大核;有性生殖期,定位于功能性小核和亲本大核,但在凋亡的大核和小核中消失。在减数分裂和有丝分裂时期,Tmlh1和α-微管蛋白(α-tubulin)存在共定位;而有性生殖后期,Tmlh1与异染色质蛋白Pdd1共定位于DNA删除的异染色结构域。TMLH1敲除细胞增殖速率降低,DNA损伤修复抑制,导致有性生殖细胞配对率降低和微核形成。1 mmol/L甲基甲磺酸甲酯(methy methanesulfonate, MM...

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 嗜热四膜虫细胞培养
    1.3 TMLH1表达谱和聚类分析
    1.4 pNeo4-TMLH1和pXS75-2HA-TMLH1重组质粒的构建
    1.5 细胞的转化和筛选
    1.6 间接免疫荧光定位
    1.7 免疫共沉淀和质谱分析
    1.8 Western 印迹检测
    1.9 统计学分析
2 结果
    2.1 TMLH1基因的分析
    2.2 Tmlh1定位于转录活跃的大核和功能性小核
    2.3 Tmlh1与α-微管蛋白在纺锤体结构的共定位T
    2.4 Tmlh1与Pdd1共定位于发育中的新大核
    2.5 敲除TMLH1影响四膜虫细胞增殖和有性生殖进程
3 讨论



本文编号：3825342