欧洲型PRRSV反向遗传操作平台构建及转录特性分析

发布时间：2023-07-24 21:44

　　猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是目前全球养猪业面临的最大困扰之一,由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起。该病毒具有变异度高,变异速度快的特点,该病的蔓延给全球养猪业造成了难以估量的损失,有效防控猪繁殖与呼吸综合征对养猪业的健康发展十分重要。PRRSV亚基因组RNA(sg RNA)的转录过程是不连续的,转录过程中会形成一系列具有相同5’和3’末端的亚基因组sg RNA。从PRRSV这一特殊的转录机制入手,或许会为PRRSV防控找到新思路。目前发现PRRSV的转录过程由基因组中众多的转录调控序列(Transcriptional regulatory sequence,TRS)调控,包括位于5’UTR中的Leader-TRS和位于基因组内的Body-TRS。根据地域分布的不同和基因差异,PRRSV被分为两种基因型,分别是欧洲型(I型)和美洲型(II型)。两种基因型的PRRSV不仅核酸同源性低,...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒
        1.1.1 PRRSV的概述
        1.1.2 PRRSV的基因组结构
        1.1.3 PRRSV遗传变异分析
        1.1.4 PRRSV的蛋白及其功能
    1.2 PRRSV转录机制的研究进展
    1.3 PRRSV反向遗传学研究进展
    1.4 研究的目的与意义
第二章 PRRSV LLV-1 毒株反向遗传平台建立及转录特性分析
    2.1 材料
        2.1.1 细胞、毒株及质粒
        2.1.3 试剂与耗材
        2.1.4 试验仪器
    2.2 方法
        2.2.1 PRRSV欧洲型LLV-1 毒株反向遗传平台的建立
        2.2.2 高通量测序样品的制备及转录组数据分析
    2.3 结果
        2.3.1 重组质粒PCDNA3.1-LLV-1 的构建
        2.3.2 LLV-1病毒分离株的拯救
        2.3.3 LLV-1毒株转录数据分析
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 欧美嵌合型PRRSV的拯救
    3.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 嵌合毒株PCDNA3.1-LLV-1-HUN4 的构建
        3.2.2 嵌合毒株LLV-1-HUN4 的拯救
        3.2.3 嵌合毒株LLV-1-HUN4 病毒学特征的鉴定
    3.3 结果
        3.3.1 PCDNA3.1-LLV-1-HUN4 质粒构建
        3.3.2 LLV-1-HuN4嵌合病毒的拯救
        3.3.3 LLV-1-HUN4 增殖及诱导IL-8/IL-10 表达特性
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 TRS及其侧翼序列对外源蛋白表达的影响
    4.1 材料
    4.2 方法
        4.2.1 探究外源基因插入位置对于外源基因表达的影响
        4.2.2 探究B-TRS对于外源基因表达的影响
    4.3 结果
        4.3.1 插入位置对于外源基因表达的影响
        4.3.2 B-TRS对于外源基因表达的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 全文总结
参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3836580