蓝细菌光敏色素Alr1966GAF2及其突变体的表达与光化学性质研究

发布时间：2023-11-11 18:26

　　采用PCR技术从鱼腥藻(Anabaena sp. PCC7120)中扩增蓝细菌光敏色素基因片段alr1966gaf2,将alr1966gaf2插入到pET-30a(+)载体中,构建表达质粒pET-alr1966gaf2。最后将Alr1966GAF2与HO1、PcyA在E. coli BL21(DE3)中共表达获得色素蛋白Alr1966GAF2,并对该蛋白的光化学性质进行分析。结果显示,色素蛋白Alr1966GAF2结合色素为藻蓝胆素(phycoerythrobilin,PCB)或藻紫胆素(phycoviolobilin,PVB),在3种不同吸收态15Z-P428 nm、中间态和15E-P514 nm之间具有顺序可逆光效应。通过定点突变技术将DXCF基序中的保守性Cys突变为Ala,获得了突变体Alr1966GAF2(C72A)。将Alr1966GAF2(C72A)与HO1、PcyA共表达,获得色素蛋白Alr1966GAF2(C72A)。研究结果表明Alr1966GAF2(C72A)结合色素为PCB,Alr1966GAF2(C72A)-PCB具有较强的荧光活性,其荧光量子的产率高达0.1...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 表达质粒的构建
        1.2.2 荧光蛋白的表达与纯化
        1.2.3 色素蛋白的SDS-PAGE
        1.2.4 色素蛋白的光谱分析
        1.2.5 色素蛋白质的变性
3 结果与分析
    3.1 Alr1966GAF2色素蛋白的表达及其锌荧光性质
    3.2 Alr1966GAF2色素蛋白的光化学性质及其顺序可逆光效应
    3.3 突变体Alr1966GAF2(C72A)结合PCB的光谱性质
    3.4 突变体Alr1966GAF2(C72A)可以共价结合胆绿素
4 讨论



本文编号：3863086