大豆促苗期根系发育相关基因Gmr937在烟草中的功能分析

发布时间：2023-11-26 16:50

　　将构建好的植物过表达载体pCAMBIA3301-Gmr937和RNAi表达载体pCAMBIA3301-Gmr937-RNAi,通过农杆菌介导的叶盘法将植物表达载体转入烟草。经PCR检测得到T₁代过表达载体阳性植株13株,RNAi表达阳性植株11株。对阳性植株进行荧光定量PCR,测定目的基因的表达量。结果表明:正常条件下,Gmr937基因在转化烟草根、叶片中表达量较高,在茎中表达量较低;转干扰表达植株目的基因在根、叶片中表达量是对照0.8倍,在茎中的表达量是对照的0.85倍。干旱条件下,转Gmr937超表达载体烟草在叶片中表达量是对照组的14倍,在根中表达量是对照组的12倍;转Gmr937-RNAi载体在根、茎中表达量是对照组的0.8倍,在叶片中表达量是对照组的0.7倍。以CaMV35s启动子为探针进行Southern杂交检测,在适宜条件下,转化的目的基因以单拷贝整合到受体烟草基因组中。测量适宜条件下培育的转基因烟草侧根总长的结果表明,超表达转基因植株和RNAi干扰转基因植株的侧根平均总长均比干旱条件下长,且不同条件下超表达侧根总长都比对照长,说明Gmr937基因对...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 试验植物
        1.1.2 载体与菌种
        1.1.3 生物试剂
    1.2 方法
        1.2.1 农杆菌转化法获得转基因植株
        1.2.2 转基因烟草的分子生物学检测
            (1)PCR检测。
            (2)Southern杂交检测。
            (3) qRT-PCR检测。
        1.2.3 转化烟草苗期侧根总长的测量
        1.2.4 转化烟草与抗旱相关生理生化指标测定
2 结果与分析
    2.1 遗传转化及转基因烟草PCR检测
    2.2 转基因T1代烟草Southern杂交检测
    2.3 T1代转化烟草苗期qRT-PCR检测
        2.3.1 正常条件下T1代转化烟草苗期qRT-PCR检测
        2.3.2 干旱条件下T1代转化烟草苗期qRT-PCR检测
    2.4 转化烟草苗期侧根总长的测定
    2.5 抗旱相关生理指标的测定
3 讨 论



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