日本七鳃鳗Lja-VLRB分子的抗体制备以及相关免疫学研究

发布时间：2024-02-26 01:57

　　七鳃鳗属脊椎动物亚门(Chordata),圆口纲(Cyclostomata),七鳃鳗科(Petromyzoniformes),是无颌脊椎动物的代表,处于无脊椎动物与脊椎动物之间,有着独特的进化地位。因可变淋巴受体(variable lymphocyte receptor,VLR)介导的适应性免疫防御系统,受到免疫学家的广泛关注。本研究利用生物信息学手段分析日本七鳃鳗(Lampetra japonica)VLRB开放阅读框c DNA(Lja-VLRB),分析结果显示VLRB开放阅读框长822bp,编码274个氨基酸,分为6个结构域,分别是SP、LRRNT、LRR1、LRRV1、LRRV2、LRRCP、LRRNT。对核酸和氨基酸序列各结构域保守性进行计算,结果显示LRRNT、LRR1和LRRCT结构域保守性最高,为75%、76%、78%。经抗原表位软件预测结果显示LRRNT、LRR1和LRRCT都有抗原结合表位。由于LRRCT端以糖基磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidyl-inositol,GPI)结合旳形式锚定在细胞膜上不利于抗原结合,最终选定LRRNT和LRR1结构域序列...

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【部分图文】：

图2.3VLRB的ORF区抗原表位预测

辽宁师范大学硕士学位论文尽管LRRCT结构域保守性很高，且具有抗原表位，但C末端含有一个苏氨酸和脯氨酸富集的茎(Stalk)区和一段疏水尾(Hydrophobictail)，通过GPI修饰,将疏水尾切掉然后锚定到膜表面，不利于抗原识别与结合，相反通过游离端的N端抗原序列用作抗原设....

图3.1Lja-VLRB酶切位点的预测

辽宁师范大学硕士学位论文第三章七鳃鳗VLRB的N端抗原序列分子克垄原核重组表达与蛋白质纯化本章节通过Primer5.0设计Lja-VLRB分子N端抗原序列引物，成功扩增出Lja-VLRB分子N端抗原序列的目的片段，构建Lja-VLRB-PMD19-T表达载体，提质粒并测序成功。成....

图3.2提取白细胞方法

辽宁师范大学硕士学位论文图3.2提取白细胞方法Fig.3.2Leukocyteextractionmethod（2）总RNA提取方法如下：1）2ml离心管中加入0.1g左右白细胞，再加入1mlRNAisoplus吹打裂解细胞。2）室温下静置10min后，加入200μl氯仿，上下剧....

图3.3琼脂糖凝胶DNA回收方法

辽宁师范大学硕士学位论文图3.3琼脂糖凝胶DNA回收方法Fig.3.3TheprotocolforagarosegelDNAextraction2）2μlPCR产物加1μl6×loadingbuffer充分混匀进行琼脂糖凝胶电泳检测。（7）Lja-VLRB分子N端抗原序列目的片段....

本文编号：3911163