转MINAC2基因芒的获得及其在NaCl胁迫下的表达

发布时间：2024-04-09 02:26

　　芒(Miscanthus sinensis)隶属于多年生高大禾草——芒属(Miscanthus),其生态效应和经济效益备受国内外研究者的关注,是中国广阔边际土地种植与利用的能源植物。为获得芒的转基因株系,同时对MINAC2基因在盐胁迫下的表达特征进行研究,本研究利用农杆菌介导法将MINAC2基因导入芒的基因组,并采用RT-qPCR技术测定了0.6%Na Cl溶液胁迫下转基因株系0、1 h、3 h、9 h、12 h、24 h、48 h的MINAC2相对表达量。获得的主要研究结果如下:(1)经PCR鉴定确定了转MINAC2基因阳性株系;(2)未经NaCl胁迫时转MINAC2基因株系的表达量显著低于对照组,然而在0.6%NaCl处理达到一定时长后转MINAC2基因株系的表达量是显著高于对照组(p<0.05),为对照组的5.93倍。通过本研究,建立了芒的农杆菌转化体系,并对MINAC2基因在芒的耐盐能力提高中所起的作用进行了初步探讨。

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

图1MINAC2基因的遗传转化

通过农杆菌介导芒属植物的遗传转化，大部分愈伤组织在含Basta和Cef的培养基上出现褐化、死亡，只有少部分愈伤组织能正常分化成苗，但其生长缓慢，最终获得抗性转化株经炼苗后移栽入土(图1)。1.2转基因植株Bar基因和35S-MINAC2基因的PCR检测

图2转化株PCR产物电泳

根据吉璐等(2015)研究结果，选取0.6%浓度NaCl进行处理，采用RT-qPCR技术，以不同胁迫时长对照植株的基因表达量为对照，相对标准值设为1，测得不同胁迫时长下转基因株系和对照植株的MINAC2表达水平。结果显示：转MINAC2基因株系在0h时MI-NAC2表达量与对照....

图30.6%NaCl胁迫的不同时间下转基因株系和对照植株的MINAC2基因表达水平

国内外的研究和本试验的结果表明，芒的抗盐性水平普遍较高(宗俊勤等,2011)，要进一步提高芒的抗盐性，关键是要通过大量的资源收集，筛选出抗性强的资源，通过杂交手段筛选出价值高的资源，而通过转基因手段选育抗性强、利用价值高的新品系只是一条可能的途径。吉璐(2013)的试验结果显示，....

图4载体pEarelyGate100-MINAC2的T-DNA区结构

MS+2mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA+0.2g/LCA(柠檬酸)+8g/L琼脂粉+30g/L蔗糖，转化阶段在培养基中加入一定浓度Cef、Basta作为筛选剂。3.4细菌培养基及试剂

本文编号：3949171