利用同源重组构建BMP6、BMPR1B真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究

发布时间：2024-04-20 03:30

　　旨在构建敖汉细毛羊BMP6、BMPR1B基因的过表达载体,而后将其导入成纤维细胞,分析转染后两基因mRNA、蛋白表达量的变化及基因间相互作用对毛囊的影响。选择40日龄敖汉细毛羊胎羊,采集组织样品,提取RNA后反转录成cDNA,通过PCR反应后利用SoSo试剂盒将纯化的目的片段与表达载体pcDNA3.1连接。酶切鉴定正确后,转至大肠杆菌DH5α感受态细胞,振荡培养并挑取单菌落扩大培养。提取质粒后将pcDNA3.1-BMP6、pcDNA3.1-BMPR1B单、共转染至成纤维细胞中。转染后测定表达量的变化并探究两基因间的作用关系。结果表明,共转染成纤维细胞后BMPR1B基因及BMPR1B蛋白的表达量均较单转染组极显著升高(P<0.01),而BMP6基因及BMP6蛋白的表达量与单转染组无显著差异(P>0.05)。因此,BMP6基因促进了BMPR1B基因的表达,BMPR1B基因对BMP6基因的表达几乎没影响。

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【部分图文】：

图1目的基因PCR扩增

图1为PCR后凝胶电泳分析结果,扩增条带单一明亮,大小分别位于537,1509bp处,与已知大小相符。2.2pcDNA3.1载体单酶切及纯化

图2pcDNA3.1表达载体单酶切

酶切结果如图2所示,pcDNA3.1载体为大小5428bp,图中条带与其大小所吻合,可用于后期的试验。2.3表达载体pcDNA3.1与目的片段重组及鉴定

图3菌液PCR扩增

菌液PCR电泳结果如图3,扩增条带单一明亮,位于537,1509bp处,分别为BMP6、BMPR1B基因。菌液测序后用Blast比对,经测序比对后碱基均未发生突变。提取重组质粒,如图4所示,1,2为pcDNA3.1-BMP6重组质粒,大小为5965bp;3,4为pcDNA....

图4重组质粒的提取

图3菌液PCR扩增2.4细胞培养

本文编号：3958807