转录终止子对麦芽糖淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中表达的影响

发布时间：2024-12-19 04:25

　　 本研究使用不同的转录终止子分别构建了6种重组菌,使其通过木糖诱导实现了麦芽糖淀粉酶基因的表达。其中B. subtilis WB600(T5)菌株粗酶液活力最高,达到161.49 U/mL,单位菌体酶活相对于对照菌提高了63.9%。对6种重组菌的发酵液使用蛋白电泳分析,发现粗酶分子量大小大约为67 kDa,与理论值一致。针对生长最好的B. subtilis WB600(T1)进行简单的发酵优化,考察了培养基中不同的碳源对重组菌生长及产酶的影响,最终得出结论,当碳源为麦芽糊精时是菌体生长最好,此时B. subtilis WB600(T1)酶活力也最高为160.91 U/mL,相对于未进行优化的菌的酶活力提高了40.9%,单位蛋白酶活提高了76.8%。

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【部分图文】：

图1 终止子PCR电泳图

从NCBI基因数据库中分别预测得到6种芽孢杆菌来源的不同转录终止子序列，如表1所示。将构建的质粒pHY300用NruΙ单酶切得到载体，构建的质粒pHY-BLMA分别用6种终止子PCR扩增得到目的片段，将PCR产物纯化后与载体连接得到重组质粒，转化E.coliJM109，挑取....

图2 菌落PCR电泳图

根据表2中的重组菌株的数据，发现野生菌没有酶活，而原始菌以及重组菌均有酶活，说明在原始菌及重组菌内都有淀粉酶的表达。发酵24h后野生菌的菌体量最多，而重组菌的菌体量相对于原始菌的较少，但重组菌的蛋白浓度有所提高，酶活有小幅度的增加，单位菌体量上的酶活有较大的提高。由于酶活提高的....

本文编号：4017653