鸡白细胞介素2和白细胞介素18基因的原核及真核表达

发布时间：2024-12-21 08:25

　　 【目的】克隆并原核和真核表达无特定病原(SPF)鸡白细胞介素2(ChIL-2)和白细胞介素18(ChIL-18)基因,为后续开展ChIL-2和ChIL-18蛋白功能、生物学活性及联合应用的免疫佐剂研究打下基础。【方法】运用RT-PCR扩增ChIL-2和ChIL-18基因,并进行测序和序列比对分析,分别构建其重组原核表达质粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18及重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18,并将重组原核表达质粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18分别转化大肠杆菌BL21,将重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18分别转染非洲绿猴肾(Vero)细胞。【结果】重组原核表达质粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18经IPTG诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,结果表明融合蛋白ChIL-2和ChIL-18在大肠杆菌中获得高效表达,表达的蛋白分子量分别为27和23 kD;重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
        1.1.1 菌种和克隆载体
        1.1.2 主要仪器设备
        1.1.3 工具酶和试剂
    1.2 试验方法
        1.2.1 引物合成
        1.2.2 无特定病原(SPF)鸡脾淋巴细胞分离培养及总RNA提取
        1.2.3 ChIL-2和ChIL-18基因克隆与鉴定
        1.2.4 ChIL-2和ChIL-18基因原核表达
        1.2.5 ChIL-2和ChIL-18基因真核表达
2 结果与分析
    2.1 ChIL-2和ChIL-18基因克隆结果
        2.1.1 ChIL-2和ChIL-18基因PCR扩增结果
        2.1.2 重组质粒pMD19-T-ChIL-2和pMD19-T-ChIL-18酶切鉴定结果
        2.1.3 ChIL-2和ChIL-18基因的测序
    2.2 ChIL-2和ChIL-18蛋白的原核表达情况
        2.2.1 重组原核表达质粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18鉴定结果
        2.2.2 融合蛋白ChIL-2和ChIL-18的诱导表达情况
    2.3 ChIL-2和ChIL-18基因的真核表达情况
        2.3.1 重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18鉴定结果
        2.3.2 融合蛋白ChIL-2和pVAX1-ChIL-18在Vero细胞内的表达情况
3 讨 论
4 结 论



本文编号：4018696