促性腺激素释放激素受体蛋白的表达纯化与功能性研究

发布时间：2025-01-05 23:03

　　促性腺激素释放激素受体(Gn RHR)是G蛋白偶联受体家族的成员,其特征是有一个七次跨膜螺旋结构,它在垂体促性腺激素细胞以及乳腺,卵巢和前列腺等的表面表达。促性腺激素释放激素(Gn RH)与其结合后,该受体与第二信使G蛋白结合,受体的激活最终导致促性腺促黄体生成激素和促卵泡激素的释放。此受体结构的研究可为突破该受体的结构解析瓶颈做铺垫,了解其具体下游作用机制做铺垫,以该受体为靶标的药物开发提供一定的理论基础,同时当此受体作为一种药物靶标时,为前列腺癌、子宫内膜异位症、青春期早熟等相关疾病的治疗提供新的思路与策略。本课题欲对Gn RHR进行表达纯化与功能性研究。针对受体蛋白目的基因进行克隆设计和克隆优化,选择不同框架构建分子克隆,并对目的蛋白进行表达纯化实验检测其蛋白表达情况。然后进行功能性研究实验,针对基因质粒进行分子突变,欲构建成对配体响应性良好的蛋白受体质粒,通过报告基因实验检验其活力。若检验受体蛋白性质良好,热稳定性高、活力性强、单一构象等,再进行蛋白表达纯化实验检测其表达情况。课题针对目的基因设计了几个框架,完成了p Fast Bac-HA-Bril-h Gn RHR-tev-O...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 G蛋白偶联受体
        1.1.1 G蛋白偶联受体概念
        1.1.2 G蛋白偶联受体结构
        1.1.3 G蛋白偶联受体功能
    1.2 促性腺激素释放激素受体
        1.2.1 促性腺激素释放激素受体背景介绍
        1.2.2 促性腺激素释放激素受体遗传变化与健康关系
        1.2.3 促性腺激素释放激素受体作用机制
        1.2.4 促性腺激素释放激素受体基因的表达调控
        1.2.5 促性腺激素释放激素受体生物学意义
        1.2.6 促性腺激素释放激素受体研究目的和意义
    1.3 国内外在该方向的研究现状及分析
        1.3.1 国外研究现状
        1.3.2 国内研究现状
    1.4 本文的主要研究内容
        1.4.1 产生高表达蛋白条件的摸索
        1.4.2 选择性质良好的蛋白
第2章 实验材料试剂与仪器
    2.1 实验材料
    2.2 实验试剂
    2.3 实验仪器
第3章 基于促性腺激素释放激素受体分子克隆的研究
    3.1 引言
    3.2 基于促性腺激素释放激素受体的分子克隆
        3.2.1 pFastBac-HA-Bril-hGnRHR-tev-OMBP-MBP-H8质粒的构建
        3.2.2 pcDNA3-HA-Flag-H10-tev-Bril-hGnRHR质粒的构建
        3.2.3 pFastBac-HA-hGnRHR-tev-OMBP-MBP质粒的构建
    3.3 本章小结
第4章 促性腺激素释放激素受体野生型蛋白表达纯化
    4.1 引言
    4.2 三种框架下促性腺激素释放激素受体蛋白表达纯化
        4.2.1 pFastBac-HA-Bril-hGnRHR-tev-OMBP-MBP-H8质粒蛋白表达纯化
        4.2.2 pcDNA3-HA-Flag-H10-tev-Bril-hGnRHR质粒蛋白表达纯化
        4.2.3 GnRHR-2MBPGαq/Gβ/Gγ复合物蛋白表达纯化
    4.3 本章小结
第5章 促性腺激素释放激素受体突变体双荧光素酶报告基因检测
    5.1 引言
    5.2 促性腺激素释放激素受体双荧光素酶报告基因检测
        5.2.1 促性腺激素释放激素受体在SRE、CRE、NFAT通路报告基因检测
        5.2.2 促性腺激素释放激素受体七组突变体报告基因检测
        5.2.3 促性腺激素释放激素受体三组突变体报告基因检测
        5.2.4 促性腺激素释放激素受体一组突变体报告基因检测
        5.2.5 促性腺激素释放激素受体两组突变体报告基因检测
        5.2.6 促性腺激素释放激素受体四组突变体报告基因检测
        5.2.7 促性腺激素释放激素受体新一组突变体报告基因检测
    5.3 本章小结
第6章 促性腺激素释放激素受体突变体蛋白表达纯化
    6.1 引言
    6.2 突变下促性腺激素释放激素受体蛋白表达纯化
    6.3 本章小结
结论
参考文献
致谢



本文编号：4023408