耐除草剂基因aroA A1501 可拆分位点的鉴定

发布时间：2025-03-19 01:51

　　 基因拆分技术（gene splitting）能有效避免转基因作物中目标性状向环境中的逃逸。为了利用基因拆分技术培育新型耐草甘膦（glyphosate）的转aroA_A1501基因水稻（Oryza sativa）,本研究依据aroA_A1501蛋白的高级结构筛选出13个可能的拆分位点,PCR的方法将aroA_A1501拆分成N端（An）和C端（Ac） 2部分,并分别与Ssp DnaE intein的N端（In）和C端（Ic）结合形成融合基因An-In和Ic-Ac。以pETDuet-1为基础载体,构建了单独含有An-In、Ic-Ac和同时含有An-In/Ic-Ac的原核表达载体共40个。将构建好的原核表达载体导入营养缺陷型大肠杆菌（Escherichia coli）菌株ER2799中,通过功能互补试验证明aroA_A1501在140/141、224/225和230/231位点处拆分后,拆分开的蛋白在蛋白内含肽intein介导下重新组装成有功能的完整蛋白。草甘膦耐受性试验证明230/231是最适宜的拆分位点,拆分...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株、载体和试剂
    1.2 引物合成
    1.3 融合基因的克隆
    1.4 原核表达载体的构建
    1.5 ER2799功能互补试验
    1.6 草甘膦耐受性检测
    1.7 RT-PCR
    1.8 荧光定量PCR
    1.9 ELASA测定酶活
2 结果与分析
    2.1 耐除草剂基因aroAA1501可拆分位点的确定
    2.2 不同位点拆分对重组蛋白功效的影响
    2.3 重组ER2799菌株中外源基因的表达分析
3 讨论
4 结论



本文编号：4036509