实用型RNA聚合酶I荧光报告系统的构建

发布时间：2021-07-23 19:00

　　目的 在pMDT-18克隆质粒载体的基础上,构建实用型的能够稳定转染甲型流感病毒RNPs并且可体外定量检测的RNA聚合酶I荧光报告系统。方法 设计并人工合成人RNA聚合酶I启动子、小鼠终止子序列及毒株A/Puerto Rico/8/34的NP基因的UTR,利用嵌合PCR方法将绿色荧光蛋白（eGFP）基因与上述元件体外连接,形成小鼠终止子-3’UTR-eGFP-5’UTR-人RNA聚合酶I启动子报告元件,将报告元件克隆至不携带任何启动子的pMDT-18质粒载体中,构建实用型RNA聚合酶I荧光报告质粒,转染稳定表达流感病毒A/Puerto Rico/8/34 RNPs的HeLa细胞,观察荧光表达及测定相对荧光度。结果 该系统在转染HeLa细胞后,无任何荧光产生,而转染稳定表达流感病毒A/Puerto Rico/8/34 RNPs的HeLa细胞后24 h、36 h、48 h和60 h均有荧光产生,强度随时间逐渐增强。结论 成功构建了实用型RNA聚合酶I荧光报告系统,有助于提高流感病毒反向遗传系统的拯救效率、研究流感病毒聚合酶功能以及探索UTR多态性对特定基因的复制或转录的影响机制,为流感工作... 

【文章来源】：国际病毒学杂志. 2020,(01)

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【参考文献】：
期刊论文
[1]稳定表达H1N1流感病毒核糖核蛋白的Hela细胞株的建立[J]. 丁小满,王昕,俞若曦,彭博,武伟华,刘慧,耿一介,董方圆,俞慕华,房师松.  热带医学杂志. 2016(02)
[2]流感病毒两种反向遗传学操作系统的初步构建[J]. 连孟洋,王昕,彭博,武伟华,刘慧,董方圆,丁小满,房师松,郑青.  中国人兽共患病学报. 2015(05)



本文编号：3299853