EGFR和PD-L1双靶向嵌合抗原受体构建及表达

发布时间：2021-07-27 18:45

　　目的 构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体（EGFR-CAR）和程序性死亡受体-配体1（PD-L1）抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法 人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验（ELISA）和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术（FACS）鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力,抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体（single-chain variable fragment,scFv）；人EGFR单克隆抗体杂交瘤系,经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区（VL和VH）基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR（引入CD137协同信号胞内功能域）与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体,使用Lenti-X Packaging Single Shots （VSV-G）共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染29... 

【文章来源】：中华微生物学和免疫学杂志. 2020,(03)

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本文编号：3306338