同一个体不同组织线粒体DNA异质性的研究

发布时间：2018-06-01 22:32

  本文选题：线粒体DNA + 异质性　； 参考：《山西医科大学》2006年硕士论文

【摘要】：目的：建立变性高效液相色谱法(DHPLC)快速筛选同一个体不同组织线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)高变区异质型的方法；同时采用直接测序法验证其发生的频率，为利用mtDNA进行法医学鉴定时作出更加合理的结果解释提供参考。 方法：收集尸体18例，，分别提取血、心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、脑组织、肌肉、皮肤、肋骨、指甲及毛发的mtDNA，共制备样本234份；并且在本实验室选取三个已知序列的样本Y1、Y2和Y3。在高变区选取两个多态性较好的区域即HV Ⅰ：nt16159-16391和HV Ⅱ：nt172-408，选用Gold~(TM) DNA聚合酶分别进行扩增并且优化扩增条件。用已知序列的样本建立两个区域各自最佳的DHPLC检测条件；采用DHPLC图谱和直接正反向测序法均相同的1#个体的所有样本建立筛选不同组织间异质型的模型。利用DHPLC筛选异质型样本，筛选出的异质型样本扩增更长的片段(包含目的片段)用ABI 310遗传分析仪进行正反向测序验证。 结果：DHPLC的最佳检测温度是HV Ⅰ：59.2℃，HV Ⅱ：55℃。DHPLC共筛选出11例个体具有异质性，而直接测序法验证只有9例个体具有异质性，其中有4例为点异质型，6例为长度异质型，有1例既有点异质型又有长度异质型。观察到异质型的个体中有4例每个个体的所有样本均在相同的位置出现了相同的异质型；有2例出现了两个碱基位置发生异质性的情况。各种组织出现异质型的频率不完全相同，其范围在27.8％-44.4％之间，其中肌肉组织出现的异质性频率最高。在所检出的异质性位点中，nt16184-16193和nt303-309的频率最高。 结论：DHPLC可快速筛选异质性，且经济、灵敏、自动化程度高。随着筛选技术和测序技术的不断发展，在mtDNA可检出的异质型越来越多，这增加了利用mtDNA进行法医学鉴定中结果解释的难度。因此在法医学应用领域必须扩大mtDNA的检测范围以增加个体识别能力。
[Abstract]:Objective: to establish a rapid method for screening the heterotypes of mitochondrial DNA(mitochondrial mtDNAs in different tissues of the same body by denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC), and to verify the frequency of its occurrence by direct sequencing. To provide a reference for the use of mtDNA forensic identification to provide a more reasonable interpretation of the results. Methods: the mtDNAs of blood, myocardium, liver, spleen, lung, kidney, pancreas, brain, muscle, skin, rib, nail and hair were collected from 18 cadavers. And the samples of three known sequences, Y1, Y2 and Y3, were selected in our laboratory. Two polymorphic regions, HV 鈪

本文编号：1965968