石斑鱼神经肽Y的重组表达及生物活性研究

发布时间：2017-12-09 23:02

本文关键词：石斑鱼神经肽Y的重组表达及生物活性研究

【摘要】：神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)是一种由36个氨基酸残基组成的神经活性多肽,广泛分布于脊椎动物中枢和外周神经系统,是含量最丰富的神经肽之一。NPY含有5个酪氨基酸残基,因其富含酪氨酸(Y),故被称为神经肽酪氨酸,属于胰多肽家族的一员。目前研究的脊椎动物中都发现有NPY,且不同物种间的NPY存在较高同源性。NPY除了可作为神经递质发挥作用,还具有提高摄食率与能量储存、降低紧张与应激等功能。NPY是目前发现活性最强的促摄食因子。本研究克隆了斜带石斑鱼NPY成熟肽序列,应用pET-SUMO大肠杆菌表达载体连接,成功构建表达斜带石斑鱼NPY成熟肽的pET-SUMO-NPY载体,通过原核大肠杆菌BL21(DE3)表达出可溶性蛋白。将NPY加入离体培养鲤鱼下丘脑-垂体组织碎片体系中,利用荧光定量PCR技术,检测NPY对鲤鱼下丘脑-垂体组织GH、GtH和PSS-2基因表达的影响。结果显示,浓度为100 nM的重组斜带石斑鱼NPY(r-ec NPY)显著上调了GH基因转录水平(P0.05),重组及化学合成的NPY均显著下调了PSS-2基因的表达(P0.05)。重组NPY组和合成NPY组对GtH基因表达的影响未达到统计学的显著性(P0.05)。因此证明重组表达的斜带石斑鱼NPY具有生物活性。本研究将重组NPY按浓度梯度添加到饲料中,对锦鲤进行为期6周的投喂实验。在第三周,对照组、Group-0.15(0.15μg r-ecNPY/g饲料)、Group-0.3(0.3μg r-ecNPY/g饲料)及Group-0.5(0.5μg r-ecNPY/g饲料)的周摄食率分别为4.079%、4.198%、4.284%及4.42%,经统计分析显示,在第3周Group-0.5的摄食率显著高于对照组(P0.05),证明重组NPY添加到饲料中对锦鲤的摄食具有一定的促进作用。摄食实验结束后,计算鲤鱼相关的生长及营养指标。结果显示,对照组、Group-0.15、Group-0.3及Group-0.5的特定生长率(specific growth rate,SGR)分别为1.5%、1.45%、1.42%及1.45%。对照组、Group-0.15、Group-0.3及Group-0.5的日摄食率分别为3.94%、3.98%、4.05%及4.11%。统计学分析显示,各NPY浓度实验组与对照组在SGR以及日摄食率方面均无显著性差异。鱼体组成数据计显示,对照组、Group-0.15、Group-0.3及Group-0.5的总蛋白含量分别为491.1(g/kg)、446.4(g/kg)、546.3(g/kg)及489.6(g/kg)。对照组、Group-0.15、Group-0.3及Group-0.5的粗脂肪含量分别为151.6(g/kg)、141.9(g/kg)、135.1(g/kg)及115.9(g/kg)。统计学分析显示各实验组与对照组的总蛋白和粗脂肪没有显著性差异,另外还有灰分、肝胰体比和内脏体比等营养指标也无显著性差异。这表明重组NPY对锦鲤主要营养成分无太大影响,且不造成鱼体内肝脏的畸形。本实验研究表明,使用这3个浓度的NPY添加到饲料中喂养6周未显著促进实验鱼的摄食与生长,仅在第3周高浓度组周摄食率显著高于对照组。是否由于添加剂量尚不够高,或经过消化NPY的完整性受破坏,没有足够量进入鱼体发挥有效的促摄食与生长作用,值得进一步研究。
【学位授予单位】：深圳大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：Q51

【参考文献】

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