脑心肌炎病毒衣壳蛋白与HuvEc相互作用蛋白的初步筛选

发布时间：2017-12-20 06:44

  本文关键词：脑心肌炎病毒衣壳蛋白与HuvEc相互作用蛋白的初步筛选　出处：《西北民族大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： EMCV 蛋白质相互作用 衣壳蛋白 分裂-泛素酵母双杂交系统

【摘要】：脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是一种单股正链无囊膜的RNA病毒,病毒的衣壳是由VP1、VP2、VP3及VP4四种结构蛋白组成,主要的抗原结构域位于VP1、VP2及VP3上,其中抗原性最强的为VP1。目前全世界EMCV流行的区域越来越广泛,且感染率呈逐年增长的趋势,但其侵染宿主的分子机制尚不明确。本试验旨在通过酵母双杂交技术,筛选人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HuvEc)中与 EMCV 衣壳蛋白有相互作用的蛋白,并分析筛选到的目的蛋白在细胞中的定位、分子功能以及主要参与的生物学过程。本试验应用分裂-泛素酵母双杂交系统,构建EMCV衣壳蛋白VP1,VP2,VP3诱饵质粒,进行HuvEc细胞的cDNA文库筛选。通过6次酵母双杂交筛选试验,β-半乳糖苷酶分析去除阴性克隆,酵母回返实验去除假阳性克隆,初步筛选得到了57个有相互作用的蛋白。其中,与VP1互作的蛋白15个,与VP2互作的蛋白39个,VP3互作的蛋白3个。BNIP3、C14orf1、SERP1、UBC、YIPF6与Bait VP1和VP2均互作;UBB与VP1,VP3均互作;SPCS1、ZUFSP与BaitVP1、VP2和VP3均互作。利用UniProtKB、PANTHER等生物信息学分析软件分析获知,筛选得到的互作蛋白主要分布在细胞质、细胞膜、细胞核、线粒体、高尔基体、内质网等一些细胞器中。这些蛋白的分子功能主要有催化活性、蛋白结合活性、分子结构活性、转运活性、翻译调节活性、通道调节活性等。主要参与的生物学过程有生物调节、细胞形成、细胞代谢、细胞增殖、细胞定位、转运及免疫反应等许多个过程。本试验的初步筛选为以后研究病毒感染及病毒致病的分子机理奠定基础,为进一步研究EMCV受体提供参考。
【学位授予单位】：西北民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘慧敏;常洪涛;杨霞;贺秀媛;陈陆;王新卫;李永涛;赵军;王川庆;;猪脑心肌炎与猪圆环病毒病二联灭活疫苗的研制和免疫效力[J];中国兽医学报;2017年01期

2 王婷;葛怀娜;郭宏;;酵母双杂交技术应用进展[J];生物技术进展;2015年05期

3 常洪涛;刘慧敏;陈陆;杨霞;赵军;王新卫;姚惠霞;王川庆;;不同动物源脑心肌炎病毒的分离、鉴定和全基因组序列分析[J];中国兽医学报;2014年09期

4 章俊;马亚琼;邱敏姿;杨蕾;卜阳;汤s，

本文编号：1311141