山东地区死亡鸭胚中细菌分离鉴定及沙门氏菌耐药性与毒力基因检测

发布时间：2018-01-06 20:30

本文关键词：山东地区死亡鸭胚中细菌分离鉴定及沙门氏菌耐药性与毒力基因检测　出处：《山东农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：沙门氏菌是一种重要的食源性致病菌,具有广泛的宿主性,作为人畜共患病其成为危害养殖业发展最为严重的病原菌之一,尤其在种鸭养殖过程中沙门氏菌可以通过种蛋垂直传播。自2014年至2016年,山东规模化种鸭孵化场的胚胎死亡率和弱雏率明显升高,并且死亡鸭胚的类型以臭蛋为主,初步怀疑是大面积细菌感染所致。由于抗菌药物在畜禽疾病防治中的大量使用,使得沙门氏菌对抗生素的耐药率不断上升,特别是多重耐药现象的不断出现,给沙门氏菌病的有效防治带来了困难。本实验旨在研究死亡鸭胚中病原菌的感染状况,以探究鸭胚在孵化过程中死亡原因;通过药敏试验和耐药基因检测,初步掌握鸭源沙门氏菌在山东的耐药情况,探究耐药情况与临床常用抗菌药的相互关系,为指导生产中种鸭的合理用药提供理论依据;分析鸭源沙门氏菌毒力基因,对沙门氏菌致病性影响,研发安全有效的疫苗奠定基础。本研究共分四部分。1.死亡鸭胚中细菌的分离鉴定通过对无破损的死亡鸭胚进行细菌分离培养、形态染色、16SrDNA鉴定等方法,从12个批次,315枚鸭胚中共分得细菌282株,分属26个种,其中245枚存在细菌感染,感染率为77.8%。在分离的所有细菌中,大肠杆菌、沙门氏菌和奇异变形杆菌分别占38.30%(108/282)、26.24%(74/282)和8.16%(23/282),是死亡鸭胚中的主要致病菌群。结果表明,造成种鸭孵化场胚胎死亡率和弱雏率明显升高的主要原因是细菌感染所致,且沙门氏菌是主要的致病菌之一。2.鸭源沙门氏菌耐药性调查采用K-B法对74株鸭源沙门氏菌进行17种抗生素(氨基糖苷类药物、喹诺酮类药物、β-内酰胺类药物等)的耐药性检测。结果显示,74株沙门氏菌对17种抗生素表现出不同程度的耐药:β-内酰胺类药物的耐药性较高,氨苄西林耐药率31.08%,头孢噻吩耐药率29.73%;氨基糖苷类药物中庆大霉素的耐药率最高占22.97%,其次是链霉素9.46%和卡那霉素2.70%;喹诺酮类药物耐药率较低,环丙沙星和诺氟沙星耐药率均为4.05%,氧氟沙星耐药率为2.70%;四环素和氯霉素类药物耐药率均较低分别为5.41%和4.05%。在分离的74株沙门氏菌中两种药物以上多重耐药菌株的耐药率占78.37%。该项研究调查表明,在治疗和预防山东地区种鸭孵化场致病性细菌感染时可以选择性配合使用喹诺酮类药物和卡那霉素,在选择使用喹诺酮类药物时,要按照生产具体情况和药物使用说明书严格控制剂量。3.鸭源沙门氏菌耐药基因的检测与鉴定对鉴定的74株沙门氏菌进行氨基糖苷类钝化酶基因三重PCR检测,该74株沙门中有13株扩增出ant(3’’)-Ia、aac(6’)-Ib、aph(3’)-IIa的特异性条带,三重基因携带率17.56%,16S甲基化酶基因未检出;喹诺酮类耐药菌株PCR扩增结果表明,qnrS基因携带率14.85%,oqxA基因携带率9.46%,oqxB基因携带率2.70%,qnrA、qnrB、qnrC和qnrD基因未检出;β-内酰胺类耐药基因TEM基因携带率27.03%。本研究结果表明氨基糖苷类钝化酶基因、喹诺酮基因和β-内酰胺基因广泛存在于鸭源沙门氏菌中,其耐药性与检测的耐药基因符合率存在差异不呈显著的相关性。4.鸭源沙门氏菌毒力基因的检测与鉴定对鉴定的74株沙门氏菌进行8种毒力基因PCR检测,SPI-1、SPI-3、SPI-4、SPI-5、stn和invJ的检出率分别是81.19%、94.59%、94.59%、79.73%、100%和66.22%。SPI-2和fim未检出。74株沙门氏菌中,仅携带2种毒力基因菌株占所有菌株的2.7%,5种毒力基因与6种毒力基因菌株分别占所有菌株的31.06%和56.76%。本研究结果表明,山东地区鸭胚中沙门氏菌分离株普遍携带有多种毒力岛核心蛋白基因,这可能是导致孵化过程中鸭胚死亡的原因之一,而沙门氏菌毒力基因与致病性的关系有待于进一步研究。
[Abstract]:This study was conducted to study the drug resistance of Salmonella in Shandong province . The results showed that the drug resistance rate of Salmonella in Shandong province was higher than that in Shandong province .

【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.61

【参考文献】