新型鹅细小病毒VP3抗体特异性ELISA检测方法的建立

发布时间：2018-02-13 20:24

  本文关键词： 新型 鹅细小病毒 VP3蛋白 酶联免疫吸附试验 血清学检测　出处：《河北大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：近年来,一种新型鹅细小病毒(GPV)在我国北方各省鸭群中出现并流行,导致发病鸭群出现短喙凸舌,生长迟缓等症状,命名为鸭短喙侏儒综合征(BADS)。本研究建立了一种基于新型GPV病毒VP3结构蛋白的间接酶联免疫吸附实验,检测血清中的GPV抗体。大肠杆菌表达的GPV-VP3衣壳蛋白经包涵体粗纯化及镍柱纯化,Western blot实验结果显示纯化后的蛋白可与GPV抗体反应。通过条件优化:抗原包被最适浓度为100 ng/孔,4℃过夜包被;使用复合封闭液封闭2 h;最佳一抗稀释倍数为1:640,作用时间为1 h;辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体稀释倍数为1:10000,二抗反应时间为1 h;TMD显色时间为15 min,建立了一种基于VP3蛋白检测新型GPV抗体的间接ELISA方法。特异性检测显示,该方法不与新城疫病毒、鸭肝炎病毒、鸭源呼肠孤病毒、禽流感病毒和传染性法氏囊病毒有交叉反应;灵敏性检测结果显示:待测血清10240倍稀释后,仍可良好检出GPV特异性抗体;临床样品检测评价显示:80份血清样本用血清中和试验(SN)和建立的ELISA方法平行检测。结果显示两种方法检测都为阳性的有32份,阴性的有48份,符合率为88.75%。该VP3-ELISA方法有高灵敏度和特异性,是一种检测血清中GPV抗体的有效的血清学检测方法。
[Abstract]:In recent years, a new type of goose parvovirus (GPVV) has been found and prevalent in duck populations in northern provinces of China, resulting in symptoms such as short beak protruding tongue and growth retardation. This study established an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) based on a novel GPV virus VP3 structural protein. Detection of GPV antibody in serum. The GPV-VP3 capsid protein expressed by Escherichia coli was purified by inclusion body and purified by nickel column. The results showed that the purified protein could react with GPV antibody. The degree is 100ng / pore 4 鈩，

本文编号：1509024