小鼠早期胚胎内部活性氧水平与胚胎凋亡通路关系的研究

发布时间：2019-10-11 18:15

【摘要】：哺乳动物的胚胎在体外早期发育过程中会发生发育阻滞、降低胚胎发育率并影响胚胎质量,最终导致细胞凋亡,而活性氧类物质(如H2O2)是造成这种现象的原因之一。目前被人们熟知的主要细胞凋亡通路是死亡受体通路、线粒体通路及内质网通路,但Caspase-12是否参与活性氧引起的内质网应激所诱导胚胎凋亡过程仍不是很清楚,另一方面活性氧诱导小鼠早期胚胎发育凋亡过程中起主要作用的凋亡通路不明。因此本试验的目的是证实活性氧诱导通过内质网通路的胚胎凋亡是否有Caspase-12参与,并探讨不同活性氧水平及不同时期中凋亡通路的主次关系。试验设置了小鼠早期胚胎内部ROS水平低、中、高水平3个组,首先利用DCFH-DA法、TUNEL法验证分组的正确性(检测2-cell、4-cell及囊胚期),其次检测Caspase-12基因的表达,证实ROS诱导的小鼠早期胚胎凋亡是否有内质网通路参与,最后检测死亡受体通路的关键基因Caspase-8,线粒体凋亡通路的关键基因Caspase-9及Caspase-3的mRNA表达水平,探讨ROS诱导的胚胎凋亡过程中不同凋亡通路的主次关系。实验结果表明:体外组2-cell、4-cell及囊胚期胚胎的活性氧水平均高于体内组的胚胎,H2O2处理组的胚胎均显著高于其他两组(P0.05),验证了分组的正确性。H2O2处理组的凋亡指数显著高于其他两组、总细胞数显著低于其他两组(P0.05),进一步验证了随着ROS水平的升高不仅影响了影响了凋亡指数,从而影响了胚胎的质量,为后续更好的研究提供基础。其次检测内质网通路的启动基因Caspase-12的表达,证实了 Caspase-12参与活性氧引起的应激过程。另外,无论ROS水平的高低,2-cell、4-cell期H2O2组诱导凋亡基因表达上调且死亡受体通路中的Caspase-8基因mRNA表达量最高;囊胚期基因表达虽然随活性氧水平升高而增强,但mRNA表达量上并无主次之分。而相同活性氧水平下,体内组、体外组及H2O2组的caspase-8基因表达量最高。综上所述,Caspase-12参与活性氧引起的内质网通路应激过程;在相同活性氧水平条件下各时期均以死亡受体通路为主。在不同活性氧水平条件下,2-cell期及4-cell期以死亡受体通路诱导胚胎凋亡为主,而囊胚期三条凋亡通路并无主次之分。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：Q132

【参考文献】