牛支原体NM2012株某些生物学特性的研究
发布时间：2020-07-19 01:18
【摘要】：为研发针对我国牛支原体流行菌株更为有效、安全、稳定的牛支原体病疫苗,本试验对牛支原体NM2012株的基因遗传稳定性和奶牛致病性及免疫原性进行了研究,并建立了检测鼠抗牛支原体抗体的间接ELISA方法。根据GenBank上登录的牛支原体NM2012株全基因组序列设计两对引物,分别以牛支原体NM2012株第6代、12代和20代菌株提取的DNA为模板,对vpmaX和GAPDH基因进行全基因扩增,将得到的目的片段与 pMD-19T克隆载体连接,并进行克降,经菌液PCR和质粒PCR鉴定为杴性的克隆菌液送华大基因测序。将测序结果与GenBank上登录的NM2012株牛支原体的vpmaX和GAPDH基因进行基因序列、氨基酸序列比对,分析其差异。结果表明,不同代次菌vpmX基因核苷酸和推导的氨基酸同源性均为100%,GAPDH基因核苷酸序列和推导的氨基酸同源性分别为99.9%～100%和99.7%～100%,说明牛支原体NM2012株vpmaX和GAPDH遗传特性较稳定。为了解牛支原体NM2012株对奶牛牛的致病性,本研究将牛支原体NM2012株第6代菌株采用气管注射的方法对荷斯坦奶牛进行人工感染试验,观察攻毒后奶牛的临床症状,血液白细胞变化,牛支原体特异性抗体IgG,试验牛于感染后14d和27d分两批处死,剖检动物观察眼观病理变化和组织学病理变化,并对肺、关节、气管等脏器进行分菌。结果显示牛支原体NM2012株对三周龄奶牛具有较强的致病性。本研究建立一种检测鼠抗牛支原体抗体的间接ELISA方法,并对牛支原体NM2012株免疫原性进研究。采用经超声裂解后的牛支原体全菌蛋白作为包被抗原,通过方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度和血清稀释倍数并对其他条件进行优化,建立检测小鼠抗牛支原体血清抗体的间接ELISA方法。经验证该方法的重复性和特异性较好,用该方法检测牛支原体NM2012株接种小鼠后不Q嬍奔涠窝逯惺罂古Ｖг宓目固逅
本文编号：2761685
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