DGKζ、PKCβⅡ在不同毛色小鼠背部皮肤中的表达和定位

发布时间：2020-11-05 00:45

　　 目的:探讨甘油二酯激酶ζ(diacylglycerol kinaseζ,DGKζ)、蛋白激酶CβⅡ(protein kinase CβⅡ,PKCβⅡ)在不同毛色小鼠背部皮肤中的表达、定位及其与毛色形成的相关性。方法:1.通过美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)官网,获取人和小鼠DGKζ的序列;运用多种在线生物信息学分析平台对人DGKζ在各器官组织中的表达及其转录因子、编码产物的信号肽、跨膜结构域、亚细胞定位预测分析,并对人DGKζ的同源性进行分析;对小鼠DGKζ序列启动子所结合的转录因子进行预测。2.取2M白、灰和黑色小鼠各6只,去毛取背部皮肤,行Real-time PCR、Western blotting和免疫组织化学ABC法染色技术检测。结果:1.生物信息学分析结果表明:DGKζ在人体皮肤中表达;预测的人DGKζ启动子可能结合的22个转录因子中ER-alpha、Sp1、p53、c-ets-1和YYY1这5个转录因子在黑素细胞中表达;人DGKζ编码产物不存在信号肽剪切位点属非分泌蛋白,无跨膜区域;主要定位于细胞核,亦定位在细胞质;人与黑猩猩、马、猫、灰仓鼠、牛、豚鼠、野猪、大鼠、小鼠和鸡DGKζ的氨基酸同源性分别为99.8%、98.3%、97.7%、96.6%、96.6%、96.4%、96.3%、96.0%、96.0%、94.6%和78.6%,系统进化树分析发现人与黑猩猩亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。预测的小鼠DGKζ启动子可能结合的13个转录因子中ER-alpha、p53和YYY1这3个转录因子在黑素细胞中表达。2.Real-time PCR检测显示,DGKζ、PKCβⅡ在三种毛色小鼠背部皮肤中mRNA表达趋势一致,均为:灰色组白色组;黑色组白色组,其差异具有统计学意义(P0.05);Western blotting检测表明,显示PKCβⅡ活性的p-PKCβⅡ/PKCβⅡ,其变化趋势与DGKζ在三种毛色小鼠背部皮肤中表达趋势一致:灰色组白色组;黑色组白色组,其差异具有统计学意义(P0.05);免疫组织化学ABC法染色检测显示,DGKζ和p-PKCβⅡ在灰色和黑色小鼠背部皮肤表皮生发层及黑素细胞、毛囊的外根鞘、毛母质细胞及毛母质的黑素细胞呈阳性表达,而在白色小鼠背部皮肤表皮生发层、毛囊的外根鞘、毛母质细胞及毛母质的黑素细胞呈阴性表达。结论:1.运用生物信息学分析预测表明,DGKζ可能在人黑素细胞中表达且在哺乳动物间保守性较高;DGKζ可能也在小鼠黑素细胞中表达。2.综合DGKζ、PKCβⅡ在灰色与白色、黑色与白色小鼠背部皮肤中的mRNA和蛋白表达水平的差异,以及DGKζ、p-PKCβⅡ在三种毛色小鼠背部皮肤表皮生发层及黑素细胞定位、毛球毛母质细胞及黑素细胞定位,提示DGKζ、PKCβⅡ可能与皮肤色素沉着及毛色形成具有相关性。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R394
【部分图文】：

山西医科大学硕士学位论文112结果2.1人和小鼠DGKδ的生物信息学分析2.1.1人DGKζ在各组织中的表达水平分析通过NCBI检索分析得到DGKδ在各组织中的表达水平（图1）。DGKζ在多种器官组织中有表达，在脑中表达量最高：24.732±10.369，在肝脏中表达量最低：0.867±0.181，在皮肤中的表达量为4.555±2.711。图1人DGKζ在各器官组织中的表达水平2.1.2人DGKζ转录因子的预测通过PROMO对人DGKζ启动子预测，得到23个可能结合转录因子的位点，转录因子包括：ER-alpha、C/EBPbeta、GR-alpha、Pax-5、p53、GR-beta、YY1、IRF-2、GATA-1、PRB、PRA、TCF-4E、FOXP3、c-ETS-1、AP-2alphaA、TFll-l、WT1、ETF、ENKTF-1、Sp1、RXR-alpha、STAT4、Elk-1。通过对以上转录因子进行文献检索，查阅到下列5个转录因子在黑素细胞中表达：ER-alpha、Sp1、p53、c-ETS-1、YY1（图2）。

山西医科大学硕士学位论文12图2人DGKζ转录因子的预测2.1.3人DGKδ信号肽和跨膜结构域的预测运用SignalP-5.0服务平台预测人DGKδ的潜在信号肽剪切位点，结果显示，不存在可能的信号肽裂解位点（图3），表明人DGKδ属于非分泌蛋白。运用TMHMM2.0Server对人DGKδ的跨膜结构域进行预测（图4）。由跨膜结构域的预测分析图可以看到，DGKδ无跨膜结构域，因此不可能是膜上的受体或定位于膜上。图3人DGKδ信号肽预测

山西医科大学硕士学位论文13图4人DGKδ跨膜结构域预测2.1.4人DGKδ亚细胞定位的预测亚细胞定位的预测一般是通过算法进行比较检索序列中包含的特征参数与各类相应的亚细胞定位的相似度，然后以一组概率值的形式做出判断。通过PSORT平台预测人DGKδ蛋白亚细胞定位，结果显示，其分布在细胞核（nuclear）的可能性为78.30%，分布在细胞质（cytoplasmic）的可能性为13.00%，分布于线粒体（mitochondrial）的可能性为8.70%（图5）。图5人DGKδ亚细胞定位78.30%13.00%8.70%细胞核（nuclear）细胞质（cytoplasmic）线粒体（mitochondrial）
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 万永山;李俊琴;张静;张开明;;银屑病患者CD34~+细胞PKCβI表达水平的检测[J];中国皮肤性病学杂志;2010年03期

2 王立英;杨念;;PKC对心肌成纤维细胞的作用概述[J];中国民族民间医药;2010年19期

3 东梅;张颐;;PKCα在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义[J];辽宁医学杂志;2008年04期

4 黄居科;陈明振;吴良贵;王刚;;PKC和MMP-9在脑膜瘤中的表达及其意义[J];广东医学;2008年09期

5 张志民;任宝华;张家颖;高心;王成坤;;变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因dgk突变的检测及临床意义[J];吉林大学学报(医学版);2008年05期

6 周明旺;柳海平;李盛华;潘文;王晓萍;乔斌;敬平福;付志斌;;阳虚质膝骨性关节炎关节软骨中PKC的表达研究[J];西部中医药;2017年10期

7 唐广义;韩涛;殷东风;李秋华;刘兆喆;;益气健脾抗癌法对结肠癌组织PKC及亚型PKCδ、PKCε蛋白表达的影响[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2016年03期

8 陈富涛;陈晋;;整合素α_5β_1和PKCα在人脑胶质瘤中的表达及临床意义[J];四川医学;2010年02期

9 王艳春;关凤英;李红;杨世杰;;牛磺酸通过抑制PKCα抗心肌成纤维细胞增殖的作用[J];药学学报;2009年06期

10 王剑英;刘俊萍;于为民;;来氟米特对糖尿病肾病大鼠PKC表达的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2008年10期

相关博士学位论文 前10条

1 韩超;吗啡通过PKC-θ-GATA3信号通路促进Th2细胞漂移的机制研究[D];南京医科大学;2019年

2 唐广义;益气健脾抗癌法对大肠癌组织PKC影响的实验研究[D];辽宁中医药大学;2016年

3 邹望远;PKCγ调控神经病理性疼痛的蛋白质组学研究[D];中南大学;2011年

4 唐福州;PKC诱导红细胞锚蛋白外翻诱发的巨噬细胞噬红细胞作用[D];重庆大学;2015年

5 徐亚明;靶向干扰PKCε的表达对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及其分子作用机制的研究[D];上海大学;2013年

6 葛华;MAPK和PKC在大鼠动脉球囊损伤术后的表达及通心络干预治疗的影响[D];中国医科大学;2003年

7 宋宗斌;PKCγ调控慢性吗啡耐受的蛋白质组学研究[D];中南大学;2012年

8 胡桂芹;甲基汞致脑发育损伤及PKC和CaN介导的细胞周期负向调控[D];吉林大学;2010年

9 赵业禹;PKCα-P120ctn-NF-κB信号通路参与流体剪切力作用下血管内皮损伤机制的研究[D];南昌大学;2020年

10 刘津平;5-HT→5-HT_（2A）R→PKC通路参与大鼠膈神经长时程易化的研究[D];第四军医大学;2009年

相关硕士学位论文 前10条

1 李静;DGKζ、PKCβⅡ在不同毛色小鼠背部皮肤中的表达和定位[D];山西医科大学;2020年

2 李艳丽;PKC ε选择性阻滞剂对心理应激状态下内皮源因子及内质网应激相关蛋白的影响[D];广西医科大学;2015年

3 陈玲珊;吗啡通过蛋白激酶C(PKC)途径对人肝癌HepG2细胞增殖的影响[D];广西医科大学;2018年

4 张玉洁;顺铂通过影响PKC对NO的作用介导其舒血管及抗肿瘤作用[D];山西医科大学;2018年

5 吴白雪;PKC参与大鼠慢性偏头痛的中枢敏化机制[D];重庆医科大学;2017年

6 国科;促红细胞生成素对心脏移植大鼠心肌损伤的影响及与PKC通路的关系[D];遵义医学院;2017年

7 王青;玉米大斑病菌PKC基因的功能研究[D];河北农业大学;2009年

8 赵巍;PKC调控玉米大斑病菌致病性的机理研究[D];河北农业大学;2011年

9 亓然;PKC在巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用研究[D];福建医科大学;2016年

10 王焱;骨折愈合过程中DGKα、PKC在大鼠脑干和小脑的表达研究[D];河北北方学院;2013年

本文编号：2870854