一株鹌鹑源甲型H7N9亚型流感病毒的致病性及传播能力研究
发布时间：2020-12-03 11:28
H7N9亚型流感病毒是一种新型重组的甲型流感病毒。2013年首次发现其可以感染人,并引起人严重的呼吸综合征,致死率极高,给全球公共卫生安全带来了严重威胁。目前对甲型H7N9亚型流感病毒的研究主要集中在野鸟源、家禽源等毒株,对鹌鹑源研究的报道并不多。因此,对2018年河北省鹌鹑源甲型H7N9亚型流感病毒分离株进行致病性和传播能力的研究,为河北省甲型H7N9亚型流感的防控提供理论和技术支撑。研究内容如下:1.完成了一株河北省 2018 年鹌鹑源甲型 H7N9 亚型流感病毒A/quail/Hebei/CH06-07/2018（H7N9）,（下文简称CH06-07毒株）的分离鉴定及生物学特性研究。同源性、氨基酸突变位点及遗传进化分析结果表明,除PB2基因和NP基因核苷酸同源性最高毒株为鸭源外,其余基因（PB1、PA、HA、NA、M、NS）核苷酸同源性最高毒株均为鸡源;CH06-07毒株的HA基因编码蛋白有G186V突变,PB2基因编码蛋白有I292V和K526R突变,PB1基因编码蛋白有I368V突变,PA基因编码蛋白有K356R和S409N突变,M1基因编码蛋白有N30D突变,M2基因编码蛋...
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１中国五次Ｈ７Ｎ９亚型禽流感疫情??Ｆｉｇ．?１?Ｔｈｅ?Ｆｉｖｅ?Ｅｐｉｄｅｍｉｃ?Ｗａｖｅｓ?ｏｆ?Ｈ７Ｎ９?ｓｕｂｔｙｐｅ?ａｖｉａｎ?ｉｎｆｌｕｅｎｚａ?ｉｎ?Ｃｈｉｎａ??
口处发生气??溶胶，采用粒子仪器管理软件（ＡＩＭ）储存原始数据并生成气溶胶的空气动力学粒径??谱图。??基于肺部液体定量雾化器的精确定量气溶胶感染：在密封性完好的麻醉笼中放入??数个浸泡过异氟烷的脱脂棉球，然后将小鼠放入麻醉笼架上，待２０？３０?ｓ后取出麻醉??的小鼠。利用肺部液体定量雾化器对小鼠进行肺部气溶胶攻毒：待小鼠麻醉后，使用??肺部液体定量雾化器吸取５０?ｐＬ的病毒液从小鼠口腔进入，当肺部液体定量雾化器的??针头位于气管分叉处时喷入病毒气溶胶，完成可精确定量的气溶胶感染（图３）。??ｒＩ??Ｉ?ｉｎｓｃ＊??Ａ肺部液体定量雾化器?Ｂ小鼠气溶胶感染??图３小鼠气溶胶感染模型??Ｆｉｇ．?３?Ｍｏｕｓｅ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ａｅｒｏｓｏｌ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??２．８两种攻毒方式对小鼠致病性的研宄??随机选取７５只健康状态良好，体重１８？２０?ｇ的６周龄ＢＡＬＢ／ｃ雌性小鼠。其中１５??２２??
?一株鹌鹑源甲型Ｈ７Ｎ９亚型流感病毒的致病性及传播能力研究???只小鼠用于攻毒后临床症状、体重变化及存活率试验，设置肺部气溶胶攻毒组、滴鼻??攻毒组、空白对照组各５只，另外６０只用于病毒的组织分布试验与小鼠肺脏组织Ｈ．Ｅ．??染色与免疫组化染色，设置肺部气溶胶攻毒组、滴鼻攻毒组、空白对照组各２０只。病??毒攻毒组分别采用肺部气溶胶攻毒和滴鼻攻毒的方法，每只小鼠接种５０?（病毒含??量为ＫｐＥＩＤＷｍＬ），不同组别小鼠单独饲养。??２．９流感病毒气溶胶采集的方法??在实验动物攻毒后１?ｄ、３?ｄ、５?ｄ，使用３０式全玻璃气溶胶采样器??（Ａｌｌ－Ｇｌａｓｓ－Ｉｍｐｉｎｇｅｒ?３０，ＡＧＩ－３０）采集气溶胶传播评价装置中的微生物气溶胶，气??溶胶采集设备设定的采样参数为１２．５?Ｌ／ｍｉｎ，采集６０?ｍｉｎ?（图４）。并对采集到的液??体状态的微生物气溶胶进行流感病毒Ｍ基因的Ｑ－ＰＣＲ，流感病毒Ｍ基因的Ｑ－ＰＣＲ??检测方法由实验室之前建立（Ｑ－ＰＣＲ引物见表１２）。分析攻毒期间气溶胶传播评价??装置中的流感病毒的含量及变化。??＼?＝?ＬＭ??Ｊ?一?…：??图４气溶胶采集模式图??Ｆｉｇ．?４?Ａｅｒｏｓｏｌ?ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ??表１２甲型Ｈ７Ｎ９流感病毒Ｑ－ＰＣＲ引物??Ｔａｂ．?１２?Ａ?（Ｈ７Ｎ９）?ｖｉｒｕｓ?Ｑ－ＰＣＲ?ｐｒｉｍｅｒ??引物?序列（５＇ｔｏ３＇）??ｐｒｉｍｅｒ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ（５’ｔｏ３’）??Ｍ－Ｆ?ＣＧＣＡＧＡＡＧＧＧＧＣＴＣＴＴＧＧＡＣＴＡ??Ｍ－Ｒ?Ａ?丁丁?Ｃ?丁?ＣＡ?丁?ＧＣＣＴＧＡＴＴＡＧＴＧＧＧＴＴＧ???２３??
本文编号：2896323
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１中国五次Ｈ７Ｎ９亚型禽流感疫情??Ｆｉｇ．?１?Ｔｈｅ?Ｆｉｖｅ?Ｅｐｉｄｅｍｉｃ?Ｗａｖｅｓ?ｏｆ?Ｈ７Ｎ９?ｓｕｂｔｙｐｅ?ａｖｉａｎ?ｉｎｆｌｕｅｎｚａ?ｉｎ?Ｃｈｉｎａ??
口处发生气??溶胶，采用粒子仪器管理软件（ＡＩＭ）储存原始数据并生成气溶胶的空气动力学粒径??谱图。??基于肺部液体定量雾化器的精确定量气溶胶感染：在密封性完好的麻醉笼中放入??数个浸泡过异氟烷的脱脂棉球，然后将小鼠放入麻醉笼架上，待２０？３０?ｓ后取出麻醉??的小鼠。利用肺部液体定量雾化器对小鼠进行肺部气溶胶攻毒：待小鼠麻醉后，使用??肺部液体定量雾化器吸取５０?ｐＬ的病毒液从小鼠口腔进入，当肺部液体定量雾化器的??针头位于气管分叉处时喷入病毒气溶胶，完成可精确定量的气溶胶感染（图３）。??ｒＩ??Ｉ?ｉｎｓｃ＊??Ａ肺部液体定量雾化器?Ｂ小鼠气溶胶感染??图３小鼠气溶胶感染模型??Ｆｉｇ．?３?Ｍｏｕｓｅ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ａｅｒｏｓｏｌ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??２．８两种攻毒方式对小鼠致病性的研宄??随机选取７５只健康状态良好，体重１８？２０?ｇ的６周龄ＢＡＬＢ／ｃ雌性小鼠。其中１５??２２??
?一株鹌鹑源甲型Ｈ７Ｎ９亚型流感病毒的致病性及传播能力研究???只小鼠用于攻毒后临床症状、体重变化及存活率试验，设置肺部气溶胶攻毒组、滴鼻??攻毒组、空白对照组各５只，另外６０只用于病毒的组织分布试验与小鼠肺脏组织Ｈ．Ｅ．??染色与免疫组化染色，设置肺部气溶胶攻毒组、滴鼻攻毒组、空白对照组各２０只。病??毒攻毒组分别采用肺部气溶胶攻毒和滴鼻攻毒的方法，每只小鼠接种５０?（病毒含??量为ＫｐＥＩＤＷｍＬ），不同组别小鼠单独饲养。??２．９流感病毒气溶胶采集的方法??在实验动物攻毒后１?ｄ、３?ｄ、５?ｄ，使用３０式全玻璃气溶胶采样器??（Ａｌｌ－Ｇｌａｓｓ－Ｉｍｐｉｎｇｅｒ?３０，ＡＧＩ－３０）采集气溶胶传播评价装置中的微生物气溶胶，气??溶胶采集设备设定的采样参数为１２．５?Ｌ／ｍｉｎ，采集６０?ｍｉｎ?（图４）。并对采集到的液??体状态的微生物气溶胶进行流感病毒Ｍ基因的Ｑ－ＰＣＲ，流感病毒Ｍ基因的Ｑ－ＰＣＲ??检测方法由实验室之前建立（Ｑ－ＰＣＲ引物见表１２）。分析攻毒期间气溶胶传播评价??装置中的流感病毒的含量及变化。??＼?＝?ＬＭ??Ｊ?一?…：??图４气溶胶采集模式图??Ｆｉｇ．?４?Ａｅｒｏｓｏｌ?ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ??表１２甲型Ｈ７Ｎ９流感病毒Ｑ－ＰＣＲ引物??Ｔａｂ．?１２?Ａ?（Ｈ７Ｎ９）?ｖｉｒｕｓ?Ｑ－ＰＣＲ?ｐｒｉｍｅｒ??引物?序列（５＇ｔｏ３＇）??ｐｒｉｍｅｒ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ（５’ｔｏ３’）??Ｍ－Ｆ?ＣＧＣＡＧＡＡＧＧＧＧＣＴＣＴＴＧＧＡＣＴＡ??Ｍ－Ｒ?Ａ?丁丁?Ｃ?丁?ＣＡ?丁?ＧＣＣＴＧＡＴＴＡＧＴＧＧＧＴＴＧ???２３??
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