利用CRISPR/Cas9技术构建FGF5基因敲除兔模型
发布时间：2020-12-04 19:45
在哺乳动物中,毛囊属于皮肤的附属结构,毛囊产生动物被毛并具有周期性生长的特点。毛囊生长周期被分为四个阶段:生长期、退化期、静止期和脱落期。在生长期,新的被毛开始生成;在退化期,毛囊生长速度减慢;在静止期,毛囊处于生长停滞阶段;在脱落期,被毛主动脱落。不同的激活剂和抑制剂不仅能决定毛囊生长的阶段,还能调控毛囊维持在特定阶段的时间。成纤维细胞生长因子5（Fibroblast Growth Factor 5,FGF5）是一种被毛周期调节因子,由FGF5突变介导的遗传性长毛表型在人和其他物种中已经被报道。然而,仍没有在新西兰大白兔中研究FGF5的敲除对兔毛囊周期调控的实验。因此,本实验使用CRISPR/Cas9技术,生产出FGF5基因敲除兔,并发现FGF5基因敲除兔具有长毛性状。本实验首先根据兔FGF5基因序列设计筛选2个靶向FGF5基因的sgRNA,将体外转录的Cas9 mRNA和FGF5 sgRNA混合物显微注射进兔受精卵细胞质中,并将注射过的受精卵移植到代孕母体。F0代个体的基因型鉴定结果显示,有2只为FGF5基因敲除兔。在扩大繁殖后,对F2代进行基因型检测,挑选FGF5双敲个体和野生型...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CRISPR/Cas9系统
第一篇文献综述第2章毛囊周期研究概述12的生发及形成就是使用这种机制的结果(87-91)。2.2毛发生长周期哺乳动物的毛囊在哺乳动物出生之后就一直处于生长和退化的交替循环。这种循环主要包括四个阶段：生长期（anagen）、退化期（catagen）、静止期（telogen）和脱落期（exogen）（也有研究将被毛生长周期分为生长期、退化期、静止期三个周期）。每个阶段的持续时间、激素情况、营养状况因物种和年龄的不同而具有一定差异。例如，在小鼠中，第一次“测试性”毛干的生长是在出生后20天开始的，这种生长经常被误认为是小鼠被毛的第一次生长。在人的一生中，头部毛囊可能会经历10-30个毛发生长周期。有研究表明，人毛发生长循环与白色脂肪组织的分布有关，白色脂肪会聚集在真皮锥中的皮脂腺附近(92-95)。图2.1毛囊周期循环Fig2.1Hairfolliclecycle(85)生长期（anagen）在小鼠中，真正的毛囊生长期出现在小鼠出生后4周。在生长期早期，毛囊
第一篇文献综述第3章FGF5在毛囊周期调控中的研究进展18白（FGFs）。FGF5可以通过抑制毛乳头细胞的生长从而抑制小鼠被毛的生长，但是，FGF5s可以通过与FGF5竞争FGFR1从而降低FGF5的活性。在小鼠皮肤中，通过皮下注射外源重组FGF5，可诱导生长期的毛囊提前进入退化期。在整个被毛生长周期中，FGF5mRNA在生长期的最后一个阶段的表达量要高于休止期，这种现象表明了FGF5对毛囊进入静止期的诱导作用(124,148-153)。图3.1FGF5突变导致的体毛过长Fig3.1ExcessivebodyhaircausedbymutatedFGF5(154)3.3结语从FGF家族被发现开始，人们对FGF家族的研究就没有停止过，FGF家族是各种细胞增值分裂及信号转导所必需的。而FGF5更是一种在毛发生长中非常重要的具有抑制作用的细胞因子。FGF5异常的动物具有较长的被毛，这种表型也被运用于毛用动物的育种中。因此，在新西兰大白兔中对FGF5基因的敲除不仅可以增加兔毛的经济价值，还能研究长毛症的机理，为脱发、掉发寻找新的治疗方法。
本文编号：2898147
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CRISPR/Cas9系统
第一篇文献综述第2章毛囊周期研究概述12的生发及形成就是使用这种机制的结果(87-91)。2.2毛发生长周期哺乳动物的毛囊在哺乳动物出生之后就一直处于生长和退化的交替循环。这种循环主要包括四个阶段：生长期（anagen）、退化期（catagen）、静止期（telogen）和脱落期（exogen）（也有研究将被毛生长周期分为生长期、退化期、静止期三个周期）。每个阶段的持续时间、激素情况、营养状况因物种和年龄的不同而具有一定差异。例如，在小鼠中，第一次“测试性”毛干的生长是在出生后20天开始的，这种生长经常被误认为是小鼠被毛的第一次生长。在人的一生中，头部毛囊可能会经历10-30个毛发生长周期。有研究表明，人毛发生长循环与白色脂肪组织的分布有关，白色脂肪会聚集在真皮锥中的皮脂腺附近(92-95)。图2.1毛囊周期循环Fig2.1Hairfolliclecycle(85)生长期（anagen）在小鼠中，真正的毛囊生长期出现在小鼠出生后4周。在生长期早期，毛囊
第一篇文献综述第3章FGF5在毛囊周期调控中的研究进展18白（FGFs）。FGF5可以通过抑制毛乳头细胞的生长从而抑制小鼠被毛的生长，但是，FGF5s可以通过与FGF5竞争FGFR1从而降低FGF5的活性。在小鼠皮肤中，通过皮下注射外源重组FGF5，可诱导生长期的毛囊提前进入退化期。在整个被毛生长周期中，FGF5mRNA在生长期的最后一个阶段的表达量要高于休止期，这种现象表明了FGF5对毛囊进入静止期的诱导作用(124,148-153)。图3.1FGF5突变导致的体毛过长Fig3.1ExcessivebodyhaircausedbymutatedFGF5(154)3.3结语从FGF家族被发现开始，人们对FGF家族的研究就没有停止过，FGF家族是各种细胞增值分裂及信号转导所必需的。而FGF5更是一种在毛发生长中非常重要的具有抑制作用的细胞因子。FGF5异常的动物具有较长的被毛，这种表型也被运用于毛用动物的育种中。因此，在新西兰大白兔中对FGF5基因的敲除不仅可以增加兔毛的经济价值，还能研究长毛症的机理，为脱发、掉发寻找新的治疗方法。
本文编号：2898147
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