基于CRISPR序列分型的鸭疫里默氏杆菌疫苗菌株筛选方法的建立及应用

发布时间：2020-12-11 05:59

　　鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）属接触类传染性疾病,感染多数禽类,发病后造成纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎和脑膜炎等症状。侵害1-8周龄鸭,对养鸭业造成极大威胁。本研究旨在建立一种高效疫苗菌株筛选方法,和传统疫苗菌株筛选方法相比大幅度降低了工作量和成本,为疫苗研制工作提供有力的技术手段。具有强致病力的菌株通常免疫保护效果较好,在某种细菌研究背景知识模糊,毒力因子尚不明确时,疫苗菌株的筛选方法通常的是,依次对各个分离株进行毒力的测定,常用不同剂量的细菌感染动物,通过测定最小致死量（MLD）或半数致死量(LD₅₀),还可以用最小感染量（MID）或半数感染量(EID₅₀)来评价。这些方法都需要将临床分离的细菌一一测定,工作量较大,比较费时费力,限制了对比菌株的数量。因此建立一种高效疫苗菌株筛选方法对疫苗研制工作有举足轻重的影响。本研究方法以鸭疫里默氏杆菌为例,以某集团实验室保存的若干RA菌株为样本,利用鸭疫里默氏杆菌的CRISPR序列作为识别标签,设计引物RAC2-F/RAC2-R并能够成功扩增不同血清型RA... 

【文章来源】：河北科技师范学院河北省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

RA菌落形态

第二章RA培养鉴定142.3.2结晶紫染色对鸭疫里默氏杆菌进行结晶紫染色，镜检如图2-2所示，RA为短小的杆状，多呈单个散在排列，或呈双或短链状排列。在RA培养过程中，一般易受大肠杆菌污染，结晶紫染色图像可较为粗略地验证RA在培养过程中是否被污染，区别常见的大肠杆菌污染。但准确鉴定其细菌的单一性，还是依靠于PCR鉴定。图2-2RA结晶紫染色图FIG.2-2RAcrystalvioletstaining2.3.3PCR鉴定对鸭疫里默氏杆菌利用两对引物（190F/843R、gyrbp1/gyrbp2）进行PCR验证，如图2-3所示，在644bp和194bp处出现明显的双条带，并且没有非特异性条带的出现。图2-3PCR扩增RA片段FIG.2-3PCRamplificationofRAfragmentM：DNAMarkerDL2000；RA：鸭疫里默氏杆菌

第二章RA培养鉴定142.3.2结晶紫染色对鸭疫里默氏杆菌进行结晶紫染色，镜检如图2-2所示，RA为短小的杆状，多呈单个散在排列，或呈双或短链状排列。在RA培养过程中，一般易受大肠杆菌污染，结晶紫染色图像可较为粗略地验证RA在培养过程中是否被污染，区别常见的大肠杆菌污染。但准确鉴定其细菌的单一性，还是依靠于PCR鉴定。图2-2RA结晶紫染色图FIG.2-2RAcrystalvioletstaining2.3.3PCR鉴定对鸭疫里默氏杆菌利用两对引物（190F/843R、gyrbp1/gyrbp2）进行PCR验证，如图2-3所示，在644bp和194bp处出现明显的双条带，并且没有非特异性条带的出现。图2-3PCR扩增RA片段FIG.2-3PCRamplificationofRAfragmentM：DNAMarkerDL2000；RA：鸭疫里默氏杆菌


本文编号：2910022