MiR-145-5p调控Ythdf2影响小鼠卵母细胞成熟和早期胚胎发育的研究
发布时间：2020-12-22 18:33
N6-甲基腺苷（m6A）是一种普遍存在于真核生物mRNA中的表观遗传学修饰,其生物学功能受到甲基转移酶、去甲基酶和识别蛋白的调控,呈现一种动态并可逆的表达模式。m6A对哺乳动物卵母细胞的成熟及早期胚胎发育有重要的作用,敲除某个m6A修饰相关的酶会影响的卵母细胞成熟和胚胎发育,然而许多参与m6A生物学功能的酶在卵母细胞成熟和胚胎发育中的作用仍然未知。因此,m6A修饰在卵母细胞和胚胎发育过程中的调控作用成为近几年研究的热点。YTHDF2是第一个被发现的m6A识别蛋白,可以与m6A结合并影响mRNA的稳定性,促进mRNA的降解。Ythdf2可以通过调节母体转录物的剂量来影响卵母细胞的发育能力以及合子基因组的激活过程。miRNA是一种长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA,在基因转录后调控中有广泛的作用。在癌症中已经报道miRNA调控YTHDF2来影响细胞的增殖和迁移,而miRNA是否可以调控Ythdf2来影响配子发生和胚胎发育至今未有报道。...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Ythdf2对卵母细胞成熟和质量的影响
第二篇研究内容第一章MiR-145-5p调控Ythdf2对小鼠卵母细胞成熟的影响22注：（A）注射si-Ythdf2后卵母细胞中Ythdf2的mRNA表达水平。（B）抑制Ythdf2后卵母细胞的成熟率。（C-D）抑制Ythdf2表达的卵母细胞孤雌激活后的胚胎卵裂率和囊胚率。***或ns都是与Con组比较，n代表每组统计的胚胎数量。2.2miR-145-5p调控卵母细胞中Ythdf2的表达miR-145-5p调控Ythdf2在肝癌细胞中已经得到验证，为了验证在卵母细胞中也存在同样的调控作用，将GV期卵母细胞分四组，以未处理的的卵母细胞作为Con组，其余的卵母细胞分别注射miR-145-5pNegative、miR-145-5pmimics和miR-145-5pinhibitor，培养卵母细胞至成熟，用实时定量PCR的方法检测Ythdf2mRNA水平以及miR-145-5p表达情况。结果显示，卵母细胞注射miR-145-5pmimics后显著提高了miR-145-5p的表达水平，注射miR-145-5pinhibitor后显著降低了miR-145-5p的表达水平（图1.2A）。miR-145-5pmimics显著抑制了Ythdf2的mRNA表达水平，相反，miR-145-5pinhibitor显著提高了Ythdf2的mRNA表达水平（图1.2B）。这表明在小鼠卵母细胞中miR-145-5p对Ythdf2为负调控作用。图1.2miR-145-5p调控卵母细胞中Ythdf2的表达Figure1.2miR-145-5pregulatesYthdf2expressioninoocytes注：（A-B）卵母细胞中注射miR-145-5pNegative、miR-145-5pmimics和miR-145-5pinhibitor后miR-145-5p和Ythdf2的表达水平。***或ns都是与Con组比较。2.3miR-145-5p调控Ythdf2影响卵母细胞发育能力已经确定抑制Ythdf2会降低卵母细胞的质量，并损害早期胚胎的发育，为了研究miR-145-5p调控Ythdf2对小鼠卵母细胞发育能力的影响。将GV期卵母细胞分五组，以未处理的的卵母细胞作为Con组，其余的卵母细胞分别注射
显著差异（图1.3A）。与si-Ythdf2组相比，si-Ythdf2+miR-145-5pinhibitor组的胚胎卵裂率（53.84±2.88%和87.36±2.10%）和囊胚率（10.40±1.21%和19.96±1.67%）显著提高，与Con组、NC组和miR-145-5pinhibitor组相比，胚胎卵裂率（89.98±2.21%，89.74±1.45%，87.12±2.33%和87.36±2.10%）和囊胚率（21.06±1.05%，20.88±1.06%，21.52±1.74%，和19.96±1.67%）则没有显著的差异（图1.2B,C）。这表明小鼠卵母细胞缺乏Ythdf2的表达时，抑制miR-145-5p可以使Ythdf2的表达恢复到正常水平，并且提高了卵母细胞的发育能力。图1.3miR-145-5p调控Ythdf2影响卵母细胞发育能力Figure1.3miR-145-5paffectsoocytedevelopmentalabilitybytargetingYthdf2注：（A）卵母细胞中注射NegativesiRNA、Ythdf2siRNA、miR-145-5pinhibitor、si-Ythdf2与miR-145-5pinhibitor的混合物后Ythdf2的mRNA表达水平。（B-C）卵母细胞中注射NegativesiRNA、Ythdf2siRNA、miR-145-5pinhibitor、si-Ythdf2与miR-145-5pinhibitor的混合物后进行孤雌激活，激活后胚胎的卵裂率和囊胚率。***或ns都是与Con组比较，n代表每组统计的胚胎数量。2.4抑制miR-145-5p对胚胎凋亡的影响胚胎囊胚率的降低可能是由于胚胎发生凋亡引起的，为了研究miR-145-5p调控Ythdf2对胚胎凋亡的影响。将GV期卵母细胞分五组，以未处理的的卵母细胞作为Con组，其余的卵母细胞分别注射NegativesiRNA、Ythdf2siRNA、miR-
【参考文献】：
期刊论文
[1]敲低MGC-803胃癌细胞YTHDF2抑制其增殖并促进其凋亡[J]. 张杰,皮静楠,刘越,余佳,冯涛. 细胞与分子免疫学杂志. 2017(12)
[2]Liquid biopsies for liquid tumors: emerging potential of circulating free nucleic acid evaluation for the management of hematologic malignancies[J]. Jay Hocking,Sridurga Mithraprabhu,Anna Kalff,Andrew Spencer. Cancer Biology & Medicine. 2016(02)
本文编号：2932221
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Ythdf2对卵母细胞成熟和质量的影响
第二篇研究内容第一章MiR-145-5p调控Ythdf2对小鼠卵母细胞成熟的影响22注：（A）注射si-Ythdf2后卵母细胞中Ythdf2的mRNA表达水平。（B）抑制Ythdf2后卵母细胞的成熟率。（C-D）抑制Ythdf2表达的卵母细胞孤雌激活后的胚胎卵裂率和囊胚率。***或ns都是与Con组比较，n代表每组统计的胚胎数量。2.2miR-145-5p调控卵母细胞中Ythdf2的表达miR-145-5p调控Ythdf2在肝癌细胞中已经得到验证，为了验证在卵母细胞中也存在同样的调控作用，将GV期卵母细胞分四组，以未处理的的卵母细胞作为Con组，其余的卵母细胞分别注射miR-145-5pNegative、miR-145-5pmimics和miR-145-5pinhibitor，培养卵母细胞至成熟，用实时定量PCR的方法检测Ythdf2mRNA水平以及miR-145-5p表达情况。结果显示，卵母细胞注射miR-145-5pmimics后显著提高了miR-145-5p的表达水平，注射miR-145-5pinhibitor后显著降低了miR-145-5p的表达水平（图1.2A）。miR-145-5pmimics显著抑制了Ythdf2的mRNA表达水平，相反，miR-145-5pinhibitor显著提高了Ythdf2的mRNA表达水平（图1.2B）。这表明在小鼠卵母细胞中miR-145-5p对Ythdf2为负调控作用。图1.2miR-145-5p调控卵母细胞中Ythdf2的表达Figure1.2miR-145-5pregulatesYthdf2expressioninoocytes注：（A-B）卵母细胞中注射miR-145-5pNegative、miR-145-5pmimics和miR-145-5pinhibitor后miR-145-5p和Ythdf2的表达水平。***或ns都是与Con组比较。2.3miR-145-5p调控Ythdf2影响卵母细胞发育能力已经确定抑制Ythdf2会降低卵母细胞的质量，并损害早期胚胎的发育，为了研究miR-145-5p调控Ythdf2对小鼠卵母细胞发育能力的影响。将GV期卵母细胞分五组，以未处理的的卵母细胞作为Con组，其余的卵母细胞分别注射
显著差异（图1.3A）。与si-Ythdf2组相比，si-Ythdf2+miR-145-5pinhibitor组的胚胎卵裂率（53.84±2.88%和87.36±2.10%）和囊胚率（10.40±1.21%和19.96±1.67%）显著提高，与Con组、NC组和miR-145-5pinhibitor组相比，胚胎卵裂率（89.98±2.21%，89.74±1.45%，87.12±2.33%和87.36±2.10%）和囊胚率（21.06±1.05%，20.88±1.06%，21.52±1.74%，和19.96±1.67%）则没有显著的差异（图1.2B,C）。这表明小鼠卵母细胞缺乏Ythdf2的表达时，抑制miR-145-5p可以使Ythdf2的表达恢复到正常水平，并且提高了卵母细胞的发育能力。图1.3miR-145-5p调控Ythdf2影响卵母细胞发育能力Figure1.3miR-145-5paffectsoocytedevelopmentalabilitybytargetingYthdf2注：（A）卵母细胞中注射NegativesiRNA、Ythdf2siRNA、miR-145-5pinhibitor、si-Ythdf2与miR-145-5pinhibitor的混合物后Ythdf2的mRNA表达水平。（B-C）卵母细胞中注射NegativesiRNA、Ythdf2siRNA、miR-145-5pinhibitor、si-Ythdf2与miR-145-5pinhibitor的混合物后进行孤雌激活，激活后胚胎的卵裂率和囊胚率。***或ns都是与Con组比较，n代表每组统计的胚胎数量。2.4抑制miR-145-5p对胚胎凋亡的影响胚胎囊胚率的降低可能是由于胚胎发生凋亡引起的，为了研究miR-145-5p调控Ythdf2对胚胎凋亡的影响。将GV期卵母细胞分五组，以未处理的的卵母细胞作为Con组，其余的卵母细胞分别注射NegativesiRNA、Ythdf2siRNA、miR-
【参考文献】：
期刊论文
[1]敲低MGC-803胃癌细胞YTHDF2抑制其增殖并促进其凋亡[J]. 张杰,皮静楠,刘越,余佳,冯涛. 细胞与分子免疫学杂志. 2017(12)
[2]Liquid biopsies for liquid tumors: emerging potential of circulating free nucleic acid evaluation for the management of hematologic malignancies[J]. Jay Hocking,Sridurga Mithraprabhu,Anna Kalff,Andrew Spencer. Cancer Biology & Medicine. 2016(02)
本文编号：2932221
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