枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因的克隆表达及酶学分析

发布时间：2020-12-26 03:16

　　目前,国内外对壳聚糖酶的研究主要集中在产壳聚糖酶菌株的筛选、酶的分离纯化及产酶条件优化等方面。由于大多微生物产生的壳聚糖酶活性较低,产量高,很难实现工业化的生产。随着分子生物学技术的不断发展,壳聚糖酶基因的克隆表达、重组、突变等技术在酶工程领域得到了广泛的应用。主要包括酶基因的定点突变,化学修饰改进酶的特性,提高酶活力和表达量等方面。运用基因工程技术克隆壳聚糖酶基因,分析酶的结构,构建产壳聚糖酶的重组微生物,是获得比自然酶活力更高、更稳定的工业酶的有效途径之一。本实验以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,成功克隆出一条壳聚糖酶基因。该基因序列大小831bp,编码277个氨基酸,理论分子量为31.3kDa,理论等电点为9.51。将该壳聚糖酶基因的DNA片段构建到热激表达载体pHsh中,得到含有壳聚糖酶基因的重组表达载体。将该表达载体转入大肠杆菌细胞中,通过菌落PCR和测序鉴定,证实了转化的成功,得到了表达壳聚糖酶的重组大肠杆菌。对重组壳聚糖酶的酶学性质进行了研究,得出结论:壳聚糖酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.0。对壳聚糖酶的热稳定性研究结果表明,当温度为35℃时,相对酶活性为1... 

【文章来源】：东华理工大学江西省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

壳寡糖的二级结构

图 2.1 pHsh 质粒结构图谱Fig. 2.1 pHsh plasmid profiles表 2.2 仪器统计表Table 2.2 instrument statistics试剂 厂家q DNA 聚合酶 TakaRa 公dNTP TakaRa 公NAMarker TakaRa 公质分子量标准 TakaRa 公ＤＮＡ提取试剂盒 TakaRa 公胶纯化回收试剂盒 天根生物公小量快速提取试剂盒 天根生物公苄靑霉素 天根生物公物（Yeast extract） 购自 Oxiod胨（Trytone） 购自 Oxiod

50bp DNA Marker；1：枯草芽孢杆菌基因组.2 枯草芽胞杆菌基因组 DNA 的琼脂糖凝胶ay bacillus coli genome DNA agarose gel elec的克隆基因组 DNA 为模板，扩增得到了壳大小的特异性目的片段，该长度的基因


本文编号：2938928