重庆三个区鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及部分生物学特性研究

发布时间：2020-12-30 02:41

　　鸭疫里默氏杆菌（Riemerellaanatipestifer,RA）是引起雏鸭传染性浆膜炎的细菌病原,也可导致鹅、火鸡、鹌鹑等多种动物发病。是养鸭业中最常见的疾病之一,鸭一旦发病常造成严重的经济损失。鸭传染性浆膜炎防控是养鸭业中的难题,一是通过抗生素防治鸭疫里默氏杆菌,但鸭疫里默氏杆菌耐药性日益突出;二是以疫苗免疫防控鸭疫里默氏杆菌,但现有研究表明鸭疫里默氏杆菌血清型众多,各个血清型间缺乏交叉保护,进而导致绝大多数疫苗只对同种血清型间流行株具有较好的保护作用,而对不同血清型间流行株保护力作用较小甚至于完全无保护力。因此,为了有效防控该病,需要进一步开展鸭疫里默氏杆菌的生物学特性研究,为防治鸭疫里默氏杆菌提供理论依据。本试验对重庆三个区县鸭场来源病料,分离鉴定鸭疫里默氏杆菌流行株,采用ERIC（Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus,肠杆菌基因间保守重复序列）PCR技术进行分离株分子分型,敏感抗菌素的筛选和耐药基因的检测,对分离株采用CAS（Chrome azurol sulfonate,铬天青）检测法进行铁载体分泌能力检测;克隆... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

菌落在巧克力平板的生长形态及革兰氏染色镜检结果

西南大学硕士学位论文143.2.4ERIC-PCR基因分型根据文献[49]ERIC-1（5-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC-3’）和ERICR-2(5’-AAGTAAGTGACTGGGGTGAGCG-3’)序列送生物公司合成引物。PCR扩增条件与体系见表3-4，扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中检测，对结果进行聚类分析。表3-4ERIC-PCR分型扩增条件与体系Table3-4ERIC-PCRtypingandamplificationconditionsandsystem扩增条件反应体系步骤温度（℃）时间（min）试剂名称体积3.3试验结果3.3.1细菌分离结果分离株在巧克力培养基上生长形态、革兰氏染色镜检结果如图3-5所示。图3-5菌落在巧克力平板的生长形态及革兰氏染色镜检结果Fig3-5GrowthmorphologyofcolonyonchocolateplateandtheresultsofGramstainingmicroscopy预变性955PremixTaqTM25变性950.45上下游引物各2退火见引物报告单235个循环模板DNA4延伸723双蒸水17终延伸7210合计50

第3章鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定153.3.216SrRNA、ompA、DnaB基因PCR扩增结果分离纯化后的细菌，16SrRNA扩增结果与预期目的片段大小一致，为1500bp。部分扩增结果如图3-6，将测序结果与GenBank收录的基因序列进行比对，鉴定出30株鸭疫里默氏杆菌。构建鸭疫里默氏杆菌的遗传进化树，结果如图3-7。对分离株进行特异性引物（ompA、DnaB）扩增，电泳检测，结果与预期目的片段大小一致，ompA为1164bp，DnaB为470bp，结果如图3-8，3-9。图3-6部分菌株16SrRNA基因扩增结果Fig3-6Amplificationresultsof16SrRNAGeneofsomestrains图3-7分离株16SrRNA基因遗传进化树Fig3-7Phylogenetictreeof16SrRNAGeneofisolate


本文编号：2946819