Bt肠毒素基因的序列分析及安全性研究

发布时间：2020-12-30 06:58

　　苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）,从1956年开始商业化生产至今,已广泛应用于防治农林病虫害,是一种应用成功的微生物杀虫剂,它的安全性关系到全人类的健康。而与它亲缘性很近的蜡状芽胞杆菌（Bacillus cereus,简称Bc）是众人周知的条件致病菌,它所产生的肠毒素是引起腹泻的重要因素之一,研究表明,Bt中也广泛存在肠毒素基因。所以本课题以Bt肠毒素的安全性为出发点进行一系列研究,为Bt的安全应用提供一定的理论基础。采用6对引物对本室保存的40株不同来源的Bt菌株肠毒素基因(ent、hblA、 bceT、nheA、nheB、nheC进行PCR检测。结果表明,其中30株Bt全部含有这6个基因。而在这6个被检肠毒素基因中,nheC基因的检出率达到100%, nheA、 nheB基因的检出率仅低于nheC基因,达到95%,检出率最低的是bceT基因,也达到了82.5%,此外,hblA基因及ent基因的检出率分别为87.5%、90%,这说明肠毒素基因确实广泛存在于Bt中。以BRC-LLP29及BRC-XQ9为模板,克隆肠毒素基因ent.hblA、hbl... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1 苏云金芽胞杆菌
        1.1 苏云金芽胞杆菌的发展史
        1.2 苏云金芽胞杆菌的分布
        1.3 苏云金芽胞杆菌的应用
        1.4 苏云金芽胞杆菌的生物活性成分
        1.5 苏云金芽胞杆菌的杀虫效果
        1.6 苏云金芽胞杆菌对生态系统的影响
    2 苏云金芽胞杆菌肠毒素研究现状
        2.1 肠毒素种类
        2.2 国内外苏云金芽胞杆菌肠毒素的检测情况
        2.3 苏云金芽胞杆菌肠毒素全长基因的克隆及序列分析
        2.4 苏云金芽胞杆菌肠毒素的活性检测
    3 苏云金芽胞杆菌与蜡质芽胞杆菌
        3.1 苏云金芽胞杆菌与蜡质芽胞杆菌的亲缘性
        3.2 苏云金芽胞杆菌与蜡质芽胞杆菌的安全性
    4 毒素调控因子PlcR
    5 本课题的研究目的及意义
第二章 Bt肠毒素基因检测
    1 材料与方法
        1.1 供试菌株
        1.2 培养基
        1.3 酶与试剂
        1.4 方法和步骤
    2 结果与分析
    3 讨论与小结
第三章 Bt肠毒素基因克隆与序列分析
    1 材料与方法
        1.1 供试菌株
        1.2 培养基
        1.3 酶与试剂
        1.4 方法和步骤
    2 结果与分析
        2.1 ent基因编码的氨基酸序列比对分析
        2.2 hblA基因编码的氨基酸序列比对分析
        2.3 hblB基因编码的氨基酸序列比对分析
        2.4 hblD基因编码的氨基酸序列比对分析
        2.5 nheA基因编码的氨基酸序列比对分析
    3 讨论与小结
第四章 Bt NheA蛋白表达及活性测定
    1 材料与方法
        1.1 供试菌株及小鼠
        1.2 培养基
        1.3 酶与试剂
        1.4 方法和步骤
    2 结果与分析
        2.1 NheA-pET32a融合蛋白的诱导表达
        2.2 Tecra BDE VIA试剂盒检测肠毒素活性
        2.3 小鼠饲养观察及体重比较
        2.4 小鼠解剖观察
    3 讨论与小结
第五章 Btplcr基因敲除
    1 材料与方法
        1.1 供试菌株
        1.2 培养基
        1.3 酶与试剂
        1.4 方法和步骤
    2 结果与分析
        2.1 Btplcr基因敲除载体构建
        2.2 plcr基因电转化
    3 讨论与小结
第六章 讨论与总结
参考文献
附录
致谢



本文编号：2947208