两种嗜盐古菌和四膜虫中circRNAs特征分析

发布时间:2020-12-31 13:41
  环状RNA(circRNA)是一类特殊的闭合环状非编码RNA,在动物中主要由5’和3’端向后剪接共价结合形成,在多细胞动物中,环状RNA具有一定的进化保守性和组织特异性。目前在多个物种中已经鉴定出数量众多的circRNA,其中一些具有重要的生物学功能。古菌作为生命进化树的三大领域之一,其在分子水平上比细菌更接近真核生物。所以古菌是研究物种进化与分类必不可少的一环。四膜虫是研究染色质和基因表达调控的理想模式生物。其主要特征是具有两个细胞核-大核和微核。本文选取了两种嗜盐古菌-地中海富盐菌、西班牙盐盒菌和四膜虫,通过RNA-seq技术、生物信息学分析手段深入分析了其circRNA的来源组成和在染色体上的定位,并以分子生物学等手段,证实两种嗜盐古菌和四膜虫中部分circRNA的存在。我们在地中海富盐菌中,检测到67个circRNAs;在西班牙盐盒菌中,检测到133个circRNAs。circRNA主要定位在两种古菌染色体上,具体来源于16S rRNA、23S rRNA、16S rRNA-23S rRNA、蛋白编码基因上。我们在四膜虫B2086中,检测到109个circRNA。circRNA主... 

【文章来源】:中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】:硕士

【部分图文】:

两种嗜盐古菌和四膜虫中circRNAs特征分析


图3.?1两种古菌在基因组上定位??图注:(A)地中海富盐菌中高可信度circRNA的定位分布(B)西班牙盐盒菌中高可信度??

长度分布,长度分布,基因,嗜盐


A??Haloferax?mediterranei?Hatoarcula?hispanica??20-j?80-??卜■■?■??r°'||?-■?i40-?I??1?.?t-M?12],??Length?of?circRNA(nt)?Length?of?circRNA(nt)??B??6CH??WM?Haloferax?mediterranei??<?M?Haloarcula?hispanica??|?4£>-??'D?IL,_s??,/?/,,??图3.?2?circRNA特点分析??图注:(A)?circRNA长度分布(B)同一基因circRNA不同亚型??3.?1.?5嗜盐古菌circRNA的验证??因为find-circ[41]算法检测circRNA是通过对RNA-seq数据中的junction?reads??来判断的,所以,我们只能判断circRNA的junction位点在基因组的位置,也就??是circRNA的起始和终止位置。而对于circRNA的内部具体的序列,算法并不??完全可靠。此外,在前面的步骤中,将在reads中的顺序与比对到基因组上的顺??序相反的reads作为下游的候选,这可能会导致通过反式剪切而来的线性RNA??也被判定为circRNA。??所以,为了更加精确的表明circRNA的存在,我们在地中海富盐菌和西班牙??盐盒菌的16SrRNA,?23SrRNA,跨16SrRNA-23SrRNA以及蛋白编码基因中选??取了部分circRNA进行验证。其中,我们在两种嗜盐古菌中各选择了?5个??circRNAs,根据其在基因组上的序列以及junction的位点,设计了

地中海,西班牙,引物,箭头


性。??A??Haloferax?mediUrrana?circRNA?Haloarcula?hispanica?drcRNA??Total?RNA?RNase?R?DNA?Total?RNA?RNaseR?DNA??????<???—*???*??疇■????疇..??——*??drc135?IB9HE9??circl57?circl56?mHHSSmH??—drci61?^m^mn??B??Junction?site?Junction?site??oo??图3.?3?RT-PCR验证地中海富盐菌、西班牙盐盒菌中circRNA??图注:(A)地中海富盐菌中验证circRNA?(左);西班牙盐盒菌中验证circRNA?(右);Total??RNA、RNase?R消化的RNA,?gDNA为负参照模板进行RT-PCR,?RT-PCR扩增结果,以??divergent?(背对背箭头)为引物,可扩增circRNA;以convergent?(头对头箭头为引物,可扩??增线性和circRNA。(B)背对背箭头为divergent引物,头对头箭头为convergent引物,蓝??色圆圈表示RNA模板,黄色线表示预期的RT-PCR产物。(背对背箭头为Divergent引物,??头对头箭头为convergent引物,total?RNA,RNase?R消化后RNA反转录产物为模板,gDNA??为负参照模板)??28??

【参考文献】:
期刊论文
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本文编号:2949704

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