棉铃虫C型凝集素3免疫作用机制的初步研究

发布时间：2017-04-09 18:05

  本文关键词：棉铃虫C型凝集素3免疫作用机制的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：无脊椎动物依靠模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRs)识别入侵病原物的病原相关分子模式(pathogen-associated molecule patterns, PAMPs),进而启动机体的先天性免疫防御过程。C型凝集素(C-type lectins, CTLs)作为一种模式识别受体,在参与机体对病原物的识别和清除的过程中发挥重要的作用。本论文主要是在课题组前期研究基础上,初步探究棉铃虫C型凝集素3(HaCTL3)参与先天免疫反应的功能及其作用机制：1. rHaCTL3能够识别并结合3种革兰氏阳性菌(Staphylococcus aureus, Microbacterium pumilum, Cellulosimicrobium funkei)和3种革兰氏阴性菌(Escherichia coli, Vibrio anguillarum, Ochrobactrum cytisi)。并且,rHaCTL3与S. aureus的结合可被肽聚糖(Peptidoglycan, PGN)和木糖(Xylose)抑制。2.棉铃虫脂肪体中HaCTL3基因表达量在注射凝胶珠2 h、6 h后显著上调,暗示HaCTL3可能参与包囊反应。将凝胶珠与rHaCTL3孵育后,能显著增强棉铃虫血细胞对该凝胶珠的包囊和黑化。此外,无论是内源血浆中HaCTL3蛋白,还是外源rHaCTL3均能识别并结合到秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的体表。3. Western blot证实HaCTL3在脂肪体和血细胞中均有表达,并且在变态期的血浆中也检测到了HaCTL3蛋白,表明HaCTL3在合成后可能被释放至血淋巴中发挥作用。免疫细胞化学进一步证实,HaCTL3主要定位于粒细胞和类绛色细胞。并且,rHaCTL3可以结合粒细胞、浆细胞和类绛色细胞。以上数据暗示,HaCTL3在抵御外界病原物(如细菌和线虫)入侵的过程中发挥重要的作用。当线虫入侵时,HaCTL3可以识别线虫表面的某种成分,然后招募粒细胞,浆细胞和类绛色细胞,进而触发由血细胞参与的包囊反应和黑化作用,最终杀死入侵物。
【关键词】：棉铃虫 模式识别受体 C型凝集素 包囊 黑化
【学位授予单位】：华中师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q965
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 1 前言10-17
• 1.1 昆虫先天性免疫概述10-13
• 1.1.1 细胞免疫10-11
• 1.1.2 体液免疫11-13
• 1.2 无脊椎动物模式识别受体13-14
• 1.3 C型凝集素(C-type Lectin)14-16
• 1.3.1 C型凝集素的序列特征14
• 1.3.2 昆虫C型凝集素的研究14-16
• 1.4 本论文的研究目的和意义16-17
• 2 材料与方法17-24
• 2.1 实验材料17-18
• 2.1.1 实验动物17
• 2.1.2 细菌与多糖17
• 2.1.3 实验试剂17-18
• 2.1.4 仪器和设备18
• 2.2 实验方法18-24
• 2.2.1 rHaCTL3的菌结合活性分析18-19
• 2.2.2 凝胶珠刺激对HaCTL3基因表达量的影响19-20
• 2.2.3 rHaCTL3促进血细胞介导的包囊反应20
• 2.2.4 rHaCTL3促进凝胶珠体内黑化20
• 2.2.5 rHaCTL3促进血浆酚氧化酶活性20-21
• 2.2.6 抗HaCTL3抗血清制备21
• 2.2.7 Western-blot21
• 2.2.8 HaCTL3与线虫的结合实验21-22
• 2.2.9 HaCTL3蛋白定位分析22-23
• 2.2.10 rHaCTL3与血细胞的结合23-24
• 3 结果24-33
• 3.1 棉铃虫HaCTL3蛋白序列糖基化修饰预测24
• 3.2 重组蛋白rHaCTL3的菌结合活性分析24-25
• 3.3 凝胶珠刺激上调棉铃虫脂肪体HaCTL3基因表达25-26
• 3.4 重组蛋白rHaCTL3增强血细胞介导的包囊反应26-27
• 3.5 rHaCTL3促进凝胶珠在棉铃虫体内的黑化27-28
• 3.6 rHaCTL3-PGN复合物激活棉铃虫血浆酚氧化酶活性28-29
• 3.7 HaCTL3与秀丽隐杆线虫的结合29-31
• 3.8 HaCTL3血细胞定位分析31-32
• 3.9 rHaCTL3能与粒细胞,浆细胞,类绛色细胞直接结合32-33
• 4 讨论33-36
• 参考文献36-40
• 硕士期间论文发表情况40-41
• 致谢41

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本文编号：295805