NbP3IPH在抵抗芜菁花叶病毒侵染过程中的功能研究
发布时间：2021-02-19 04:30
芜菁花叶病毒（Turnip Mosaic Virus,TuMV）是马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的一员,该属病毒大多是以蚜虫进行非持久方式传播,在多种作物如甘蓝和白菜等均造成重大危害与损失。TuMV为单分子线形正义单链RNA（single-stranded RNA,ssRNA）病毒,编码一个多聚蛋白,并且该多聚蛋白经蛋白酶水解后分为10种病毒蛋白,包括P1、P3、6K1、6K2、HC-Pro、NIa-Vpg、NIa-Pro、NIb、CI、CP以及在P3编码区域中的P3N-PIPO蛋白。其中膜蛋白6K2被证实与病毒的复制囊泡相关,通过参与病毒的复制与运动进而达到利于病毒侵染的目的。本研究通过探究本氏烟中一个未知功能蛋白NbP3IPH与TuMV之间的关系,分析其在抵抗TuMV侵染过程中的功能与作用。首先我们通过对NbP3IPH序列和定位情况进行分析,发现NbP3IPH定位于细胞核和细胞膜以及叶绿体,并通过预测软件预测该序列的前32位氨基酸为叶绿体信号肽;并且感染TuMV后诱导NbP3IPH下调表达;其次利用烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一章 文献综述
1.1 芜菁花叶病毒（Turnip Mosaic Virus,TuMV）
1.1.1 TuMV编码蛋白的功能研究
1.1.2 TuMV的复制与运动研究进展
1.1.3 TuMV组分与寄主蛋白的互作研究
1.1.4 TuMV与介体昆虫的研究
1.2 植物抗病毒途径研究进展
1.2.1 RNA沉默参与植物抗病毒病
1.2.2 植物激素参与植物抗病毒病
1.2.3 自噬途径参与植物抗病毒病
1.3 研究目的与意义
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 供试植株
2.1.2 供试菌株及载体
2.2 试剂与仪器
2.2.1 试剂
2.2.2 仪器
2.3 实验方法
2.3.1 Trizol法提取植物总RNA
2.3.2 反转录合成cDNA
2.3.3 克隆载体的构建
2.3.4 表达载体的构建
2.3.5 实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）
2.3.6 蛋白杂交检测（Western blot）
2.3.7 亚细胞定位
2.3.8 酵母双杂交（Yeast two hybrid,Y2H）
2.3.9 双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescence complementation, Bi FC）
2.3.10 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）
第三章 NbP3IPH在TuMV侵染过程中的功能研究
3.1 NbP3IPH的定位分析
3.2 TuMV侵染后诱导NbP3IPH下调表达
3.3 系统沉默NbP3IPH促进TuMV侵染
3.4 局部超表达NbP3IPH抑制TuMV侵染
第四章 NbP3IPH对TuMV 6K2功能的影响
4.1 NbP3IPH与TuMV 6K2互作
4.2 NbP3IPH通过自噬途径降解TuMV 6K2蛋白
4.3 NbP3IPH、TuMV 6K2与自噬相关基因ATGs相互作用关系
第五章 结论与讨论
5.1 结论
5.1.1 NbP3IPH在TuMV侵染过程中的功能分析
5.1.2 NbP3IPH对TuMV 6K2功能的影响
5.2 讨论
参考文献
附录
致谢
攻读学位论文期间发表文章
【参考文献】：
期刊论文
[1]大白菜芜菁花叶病毒病抗性等位性研究[J]. 满卫萍,张志刚,刘栓桃,王荣花,王立华,许念芳,徐文玲,刘贤娴,刘辰,李巧云,赵智中. 农业生物技术学报. 2019(12)
[2]甘蓝抗芜菁花叶病毒育种研究进展[J]. 吕红豪,邢苗苗,杨丽梅,庄木,张扬勇,王勇,方智远. 园艺学报. 2019(09)
[3]Salicylic Acid and its Function in Plant Immunity[J]. Chuanfu An and Zhonglin Mou Department of Microbiology and Cell Science,University of Florida,Gainesville,FL 32611,USA. Journal of Integrative Plant Biology. 2011(06)
本文编号：3040601
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一章 文献综述
1.1 芜菁花叶病毒（Turnip Mosaic Virus,TuMV）
1.1.1 TuMV编码蛋白的功能研究
1.1.2 TuMV的复制与运动研究进展
1.1.3 TuMV组分与寄主蛋白的互作研究
1.1.4 TuMV与介体昆虫的研究
1.2 植物抗病毒途径研究进展
1.2.1 RNA沉默参与植物抗病毒病
1.2.2 植物激素参与植物抗病毒病
1.2.3 自噬途径参与植物抗病毒病
1.3 研究目的与意义
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 供试植株
2.1.2 供试菌株及载体
2.2 试剂与仪器
2.2.1 试剂
2.2.2 仪器
2.3 实验方法
2.3.1 Trizol法提取植物总RNA
2.3.2 反转录合成cDNA
2.3.3 克隆载体的构建
2.3.4 表达载体的构建
2.3.5 实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）
2.3.6 蛋白杂交检测（Western blot）
2.3.7 亚细胞定位
2.3.8 酵母双杂交（Yeast two hybrid,Y2H）
2.3.9 双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescence complementation, Bi FC）
2.3.10 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）
第三章 NbP3IPH在TuMV侵染过程中的功能研究
3.1 NbP3IPH的定位分析
3.2 TuMV侵染后诱导NbP3IPH下调表达
3.3 系统沉默NbP3IPH促进TuMV侵染
3.4 局部超表达NbP3IPH抑制TuMV侵染
第四章 NbP3IPH对TuMV 6K2功能的影响
4.1 NbP3IPH与TuMV 6K2互作
4.2 NbP3IPH通过自噬途径降解TuMV 6K2蛋白
4.3 NbP3IPH、TuMV 6K2与自噬相关基因ATGs相互作用关系
第五章 结论与讨论
5.1 结论
5.1.1 NbP3IPH在TuMV侵染过程中的功能分析
5.1.2 NbP3IPH对TuMV 6K2功能的影响
5.2 讨论
参考文献
附录
致谢
攻读学位论文期间发表文章
【参考文献】：
期刊论文
[1]大白菜芜菁花叶病毒病抗性等位性研究[J]. 满卫萍,张志刚,刘栓桃,王荣花,王立华,许念芳,徐文玲,刘贤娴,刘辰,李巧云,赵智中. 农业生物技术学报. 2019(12)
[2]甘蓝抗芜菁花叶病毒育种研究进展[J]. 吕红豪,邢苗苗,杨丽梅,庄木,张扬勇,王勇,方智远. 园艺学报. 2019(09)
[3]Salicylic Acid and its Function in Plant Immunity[J]. Chuanfu An and Zhonglin Mou Department of Microbiology and Cell Science,University of Florida,Gainesville,FL 32611,USA. Journal of Integrative Plant Biology. 2011(06)
本文编号：3040601
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