Leukamenin E诱导HUVEC细胞K8/18磷酸化引起角蛋白网络组装抑制的研究
发布时间：2021-02-22 11:24
角蛋白为细胞提供了必要的结构支持,能够调控细胞黏着及细胞生长,并且能够抵御各种胁迫。角蛋白纤维深度参与了细胞的各种生命活动,包括:细胞信号传导、细胞凋亡、细胞胁迫响应等重要细胞生命过程,不仅如此,角蛋白纤维还与细胞迁移相关。角蛋白8（K8）和角蛋白18（K18）是HUVEC细胞中含量最为丰富的角蛋白,K8及K18的磷酸化是角蛋白翻译后修饰的重要方式之一。我们发现,K8及K18的磷酸化能够调节角蛋白的可溶性,并且参与角蛋白网络的组装调节。本实验室研究表明,对映-贝壳杉烷二萜leukamenin E是一种具有显著抗肿瘤活性的植物次生代谢产物,对多种癌细胞株显示了生长抑制、分化及凋亡诱导效应,但分子机制还很不明确。因此,进一步探究该化合物对细胞角蛋白的影响对于阐明其作用机制以及抗癌新药的发现具有重要的科学价值。本文以对映-贝壳杉烷型二萜化合物leukamenin E为受试药物,用人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC）和人胰腺癌细胞（Pancreatic cancer cells,Panc-1）为受试细胞株,通过MTT法、A...
【文章来源】：西北师范大学甘肃省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LeukameninE的分子结构图；Fig.2-1ChemicalstructureofleukameninE.
3结果与分析203结果与分析3.1LeukameninE对细胞活力及凋亡的影响目前已有报道表明，细胞凋亡可能伴随着角蛋白的分解和中等纤维的重组[87]。为了排除leukameninE诱导的细胞凋亡引发的角蛋白的分解和中等纤维的重组干扰后续的实验，我们分别通过MTT法和AO/EB染色法检查了不同浓度的leukameninE对细胞活力和细胞凋亡的影响情况。结果发现与对照组相比，leukameninE在2.0-4.0μmol/L时对HUVEC和Panc-1细胞具有明显的增殖抑制作用（图3-1），但经leukameninE处理的细胞的凋亡率低于3.2%，坏死率低于1.2%（图3-2）。因此，我们认为如此低的凋亡条件并不会引起角蛋白的分解和中等纤维的重组，所以在本文中，我们选择在实验中使用2.0-4.0μmol/L的leukameninE用于后续实验。图3-1MTT法检测leukameninE及DMSO对HUVEC和Panc-1细胞活力的影响Fig.3-1CellviabilityassayofHUVECandPanc-1treatedwithleukameninE(2μmol/L,2.5μmol/L,3μmol/L,3.5μmol/Land4μmol/L)andDMSOfor24hbasedonMTT.
3结果与分析21图3-2通过AO/EB双染检测leukameninE对HUVEC和Panc-1细胞凋亡和坏死的影响(A)通过AO/EB双染leukameninE处理的HUVEC和Panc-1细胞来区分细胞凋亡状态，根据不同的染色结果可以观察到四种类型的细胞。(B)用leukameninE处理24h的HUVEC和Panc-1细胞中的凋亡率。(C)用leukameninE处理24h的HUVEC和Panc-1细胞中的坏死率。图像来自至少三个独立实验的典型细胞显示的数据代表。三个独立实验的平均值±标准差(S.D.)。Fig.3-2EvaluationofapoptosisofHUVECandPanc-1cellstreatedwithleukameninEbyAO/EBdoublestaining.FourtypesofcellswereobservedbyAO/EBstaining(A)EvaluationofapoptosisofHUVECPanc-1cellstreatedwithleukameninEbyAO/EBdoublestaining.FourtypesofcellswereobservedbyAO/EBstainingasindicatedbythearrowsinthepictures.(B)ApoptoticrateinHUVECandPanc-1cellstreatedwithleukameninEfor24h.(C)NecroticrateinHUVECandPanc-1cellstreatedwithleukameninEfor24h.Imagesrepresenttypicalcellsfromatleastthreeindependentexperiments.Thedatashownrepresentthemeans±standarddeviation(S.D.)ofthreeindependentexperiments.3.2LeukameninE独立于微丝、微管抑制角蛋白组装3.2.1HUVEC具有独立于微丝、微管的角蛋白纤维在许多细胞类型中，某些类型的细胞骨架解聚通常会伴随着另一个细胞骨架
【参考文献】：
期刊论文
[1]Rabdosin B对急性早幼粒白血病细胞HL-60分化的诱导作用[J]. 魏婧昕,丁兰,刘扬,李佩蔚,刘国安. 中草药. 2018(11)
[2]水通道蛋白1在肿瘤进展中的作用及其抑制剂研究进展[J]. 张智昱,武娟,李学军. 药学学报. 2018(06)
[3]上皮样组织细胞瘤1例[J]. 苏婷,孙亚琪,陈怡雯,张美华,苏忠兰. 皮肤性病诊疗学杂志. 2017(05)
[4]对映-贝壳杉烷型二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病HL-60细胞分化的诱导作用[J]. 丁兰,李佩蔚,孔花青,陈宗儒,刘国安. 中国药房. 2016(13)
[5]细胞骨架与细胞迁移研究进展[J]. 秦伟,王婷. 中国民族民间医药. 2014(23)
[6]我国恶性肿瘤发病现状及趋势[J]. 吴菲,林国桢,张晋昕. 中国肿瘤. 2012(02)
[7]细胞骨架研究进展[J]. 谢朝晖,陈兰英. 癌变·畸变·突变. 2011(04)
[8]单个肿瘤细胞测序研究进展[J]. 吴松,蔡志明. 生命科学. 2011(01)
[9]微囊藻毒素LR影响人肝细胞HL7702的ERK及JNK的蛋白磷酸化[J]. 孙瑜,黄朴,徐立红. 水生生物学报. 2011(01)
[10]甘肃产蓝萼香茶菜二萜化学成分研究[J]. 丁兰,王炜,汪涛,王丽,汪汉卿. 广西植物. 2008(02)
博士论文
[1]细胞骨架对大鼠背根神经节持续受压后痛觉过敏的调控及机制研究[D]. 魏慧.山东大学 2013
本文编号：3045919
【文章来源】：西北师范大学甘肃省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LeukameninE的分子结构图；Fig.2-1ChemicalstructureofleukameninE.
3结果与分析203结果与分析3.1LeukameninE对细胞活力及凋亡的影响目前已有报道表明，细胞凋亡可能伴随着角蛋白的分解和中等纤维的重组[87]。为了排除leukameninE诱导的细胞凋亡引发的角蛋白的分解和中等纤维的重组干扰后续的实验，我们分别通过MTT法和AO/EB染色法检查了不同浓度的leukameninE对细胞活力和细胞凋亡的影响情况。结果发现与对照组相比，leukameninE在2.0-4.0μmol/L时对HUVEC和Panc-1细胞具有明显的增殖抑制作用（图3-1），但经leukameninE处理的细胞的凋亡率低于3.2%，坏死率低于1.2%（图3-2）。因此，我们认为如此低的凋亡条件并不会引起角蛋白的分解和中等纤维的重组，所以在本文中，我们选择在实验中使用2.0-4.0μmol/L的leukameninE用于后续实验。图3-1MTT法检测leukameninE及DMSO对HUVEC和Panc-1细胞活力的影响Fig.3-1CellviabilityassayofHUVECandPanc-1treatedwithleukameninE(2μmol/L,2.5μmol/L,3μmol/L,3.5μmol/Land4μmol/L)andDMSOfor24hbasedonMTT.
3结果与分析21图3-2通过AO/EB双染检测leukameninE对HUVEC和Panc-1细胞凋亡和坏死的影响(A)通过AO/EB双染leukameninE处理的HUVEC和Panc-1细胞来区分细胞凋亡状态，根据不同的染色结果可以观察到四种类型的细胞。(B)用leukameninE处理24h的HUVEC和Panc-1细胞中的凋亡率。(C)用leukameninE处理24h的HUVEC和Panc-1细胞中的坏死率。图像来自至少三个独立实验的典型细胞显示的数据代表。三个独立实验的平均值±标准差(S.D.)。Fig.3-2EvaluationofapoptosisofHUVECandPanc-1cellstreatedwithleukameninEbyAO/EBdoublestaining.FourtypesofcellswereobservedbyAO/EBstaining(A)EvaluationofapoptosisofHUVECPanc-1cellstreatedwithleukameninEbyAO/EBdoublestaining.FourtypesofcellswereobservedbyAO/EBstainingasindicatedbythearrowsinthepictures.(B)ApoptoticrateinHUVECandPanc-1cellstreatedwithleukameninEfor24h.(C)NecroticrateinHUVECandPanc-1cellstreatedwithleukameninEfor24h.Imagesrepresenttypicalcellsfromatleastthreeindependentexperiments.Thedatashownrepresentthemeans±standarddeviation(S.D.)ofthreeindependentexperiments.3.2LeukameninE独立于微丝、微管抑制角蛋白组装3.2.1HUVEC具有独立于微丝、微管的角蛋白纤维在许多细胞类型中，某些类型的细胞骨架解聚通常会伴随着另一个细胞骨架
【参考文献】：
期刊论文
[1]Rabdosin B对急性早幼粒白血病细胞HL-60分化的诱导作用[J]. 魏婧昕,丁兰,刘扬,李佩蔚,刘国安. 中草药. 2018(11)
[2]水通道蛋白1在肿瘤进展中的作用及其抑制剂研究进展[J]. 张智昱,武娟,李学军. 药学学报. 2018(06)
[3]上皮样组织细胞瘤1例[J]. 苏婷,孙亚琪,陈怡雯,张美华,苏忠兰. 皮肤性病诊疗学杂志. 2017(05)
[4]对映-贝壳杉烷型二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病HL-60细胞分化的诱导作用[J]. 丁兰,李佩蔚,孔花青,陈宗儒,刘国安. 中国药房. 2016(13)
[5]细胞骨架与细胞迁移研究进展[J]. 秦伟,王婷. 中国民族民间医药. 2014(23)
[6]我国恶性肿瘤发病现状及趋势[J]. 吴菲,林国桢,张晋昕. 中国肿瘤. 2012(02)
[7]细胞骨架研究进展[J]. 谢朝晖,陈兰英. 癌变·畸变·突变. 2011(04)
[8]单个肿瘤细胞测序研究进展[J]. 吴松,蔡志明. 生命科学. 2011(01)
[9]微囊藻毒素LR影响人肝细胞HL7702的ERK及JNK的蛋白磷酸化[J]. 孙瑜,黄朴,徐立红. 水生生物学报. 2011(01)
[10]甘肃产蓝萼香茶菜二萜化学成分研究[J]. 丁兰,王炜,汪涛,王丽,汪汉卿. 广西植物. 2008(02)
博士论文
[1]细胞骨架对大鼠背根神经节持续受压后痛觉过敏的调控及机制研究[D]. 魏慧.山东大学 2013
本文编号：3045919
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