SRC3蛋白纯化和结构解析
发布时间：2021-04-12 14:16
作为细胞核激素受体的核心转录共激活因子,p160家族的三个同源成员蛋白（SRC1,SRC2和SRC3）中的SRC1（NCOA1）在1995被发现,之后SRC2（也称TIF2,GRIP1或NCOA2）和SRC3（也称P/CIP,RAC3,AIB1,ACTR,TRAM1或NCOA3）相继被发现。大量的文献报道SRCs家族成员不仅是细胞核激素受体的关键转录共激活因子,还广泛参与其它转录因子的转录调控,此外SRC3还在癌症中扮演重要的作用。SRC3以及SRC1在1997年被报道具有乙酰化修饰酶活性,但之后关于这两者的酶活真实性科学界一直存在争议,且后续没有SRC3蛋白本身以及关于其酶活的结构信息报道。我们想通过解析SRC3蛋白结构为SRC3的相关研究提供结构依据并为其是否具有乙酰化酶活提供结构信息。另外,解析SRC3的结构可以为开发针对SRC3的小分子抑制剂,用于今后SRC3相关癌症的临床治疗提供帮助。为了获得结构研究所需的大量SRC3蛋白,我们首先选择使用最简单、快速且成本较低的大肠杆菌系统进行不同的SRC3截短体蛋白的表达和分离纯化,但发现SRC3在大肠杆菌系统表达很低,即便我们进行了不同...
【文章来源】：华东师范大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Waddington的古典表观遗传景观[4]1957年ConradWaddington提出了表观遗传学概念，以代表细胞决策的过程
21.2组蛋白修饰1.2.1组蛋白修饰类型与功能组蛋白是染色体的重要组成部分，染色体由DNA、组蛋白以及非组蛋白几部分构成，染色体的基本结构单位是核小体，核小体是2分子H2A、H2B、H3以及H4组成组蛋白八聚体并由147bpDNA分子缠绕形成。每分子核小体八聚体之间由铰链核酸和一分子H1组蛋白连接形成染色质，染色质继续折叠固缩形成染色体。染色质结构中组蛋白尾巴裸漏在外，其可以发生多种组蛋白修饰。近年来随着质谱技术的飞速发展，以芝加哥大学赵英明教授实验室为首，先后鉴定了包括丙酰化，丁酰化，巴豆酰化，棕榈酰化，乳酸化等新型蛋白质翻译后修饰（post-translationalmodification，PTM）[5-7]。组蛋白尾巴上含有多个可以修饰的氨基酸，其中经典的修饰发生在以精氨酸、赖氨酸为主的氨基酸上。多发生包括甲基化、ADP-核糖基化、泛素化、磷酸化、糖基化，以及其他酰基化修饰。大量的文献报道集中在酰化修饰、甲基化以及磷酸化修饰，科学界普遍认为这些组蛋白修饰在很大程度上决定了染色质的结构和开放状态。近年的科研发现了很多修饰相关酶，这些酶负责“书写”和“擦除”表观遗传标记。下面我们将对其中部分修饰进行介绍。图1.2.1a组蛋白H3表观修饰的“书写器”、“阅读器”和“擦除器”[8]。左侧标出翻译后修饰（PTM）的组蛋白H3尾部赖氨酸残基。阴影块指示为远端增强子的长度。绿色表示甲基化，蓝色表示活性基因相关的组蛋白乙酰化标记，红色表示沉默的基因。右侧列出了一些相关酶。
华东师范大学硕士学位论文3组蛋白甲基化修饰无疑是表观遗传学的一大热土。近年来科学家在组蛋白甲基化修饰领域投入了大量资源，该领域也已发表众多科研成果，细数组蛋白甲基化研究历程我们会发现早在1960年RNA的合成即被证明受到了组蛋白中氨基的甲基化调节[9,10]，但是直到2000年，才发现了第一个组蛋白KMT，即人源SUV39H1（KMT1A），该工作由ThomasJenuwein和他的同事完成，并证明该酶从酵母到人具有高度保守性[11]。由于KMT1A的发现，后续根据SET结构域的同源性搜索，Dillon等人先后确定了数十种KMT[12]。另外，除了含有SET结构域的甲基转移酶之外，还有一类组蛋白甲基化转移酶不含有SET结构域即KMT4，但两种类型甲基转移酶具有一个共同点即是都以S-腺苷-甲硫氨酸（SAM）作为甲基供体[12-15]。甲基化修饰具体分为以下几种类型，图1.2.1b组蛋白甲基化普遍机制[16]。其中赖氨酸上可以发生单甲基、二甲基、三甲基化，精氨酸上可以发生单甲基化、对称二甲基化和非对称二甲基化，另外据报道组蛋白也可以发生单甲基化修饰[10,17-20]。现今为止，研究最为广泛的甲基化位点包括赖氨酸的H3K4、H3K9、H3K27、H3K36、H3K79以及H4K20和精氨酸的H3R2、H3R8、H3R17、H3R26、H4R3。回首过去，很长一段时间科学界认为组蛋白甲基化修饰是一种不可逆的修饰，直到H3K4去甲基化酶KDM1（LSD1）的发现证明了组蛋白甲基化修饰为可逆的修饰类型[21]。按照该研究的思路，现如今已发现一大批甲基转移酶和组蛋白去甲基化酶，他们分别识别不同的底物，作用在不同的甲基化位点履行着去除甲基的功能[22]。但是值得注意的是组蛋白上的甲基化标记并不孤立存在。同一组蛋白
【参考文献】：
期刊论文
[1]SRC-3/AIB1:transcriptional coactivator in oncogenesis[J]. Sophia Y TSAI,Ming-jer TSAI. Acta Pharmacologica Sinica. 2006(04)
本文编号：3133444
【文章来源】：华东师范大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Waddington的古典表观遗传景观[4]1957年ConradWaddington提出了表观遗传学概念，以代表细胞决策的过程
21.2组蛋白修饰1.2.1组蛋白修饰类型与功能组蛋白是染色体的重要组成部分，染色体由DNA、组蛋白以及非组蛋白几部分构成，染色体的基本结构单位是核小体，核小体是2分子H2A、H2B、H3以及H4组成组蛋白八聚体并由147bpDNA分子缠绕形成。每分子核小体八聚体之间由铰链核酸和一分子H1组蛋白连接形成染色质，染色质继续折叠固缩形成染色体。染色质结构中组蛋白尾巴裸漏在外，其可以发生多种组蛋白修饰。近年来随着质谱技术的飞速发展，以芝加哥大学赵英明教授实验室为首，先后鉴定了包括丙酰化，丁酰化，巴豆酰化，棕榈酰化，乳酸化等新型蛋白质翻译后修饰（post-translationalmodification，PTM）[5-7]。组蛋白尾巴上含有多个可以修饰的氨基酸，其中经典的修饰发生在以精氨酸、赖氨酸为主的氨基酸上。多发生包括甲基化、ADP-核糖基化、泛素化、磷酸化、糖基化，以及其他酰基化修饰。大量的文献报道集中在酰化修饰、甲基化以及磷酸化修饰，科学界普遍认为这些组蛋白修饰在很大程度上决定了染色质的结构和开放状态。近年的科研发现了很多修饰相关酶，这些酶负责“书写”和“擦除”表观遗传标记。下面我们将对其中部分修饰进行介绍。图1.2.1a组蛋白H3表观修饰的“书写器”、“阅读器”和“擦除器”[8]。左侧标出翻译后修饰（PTM）的组蛋白H3尾部赖氨酸残基。阴影块指示为远端增强子的长度。绿色表示甲基化，蓝色表示活性基因相关的组蛋白乙酰化标记，红色表示沉默的基因。右侧列出了一些相关酶。
华东师范大学硕士学位论文3组蛋白甲基化修饰无疑是表观遗传学的一大热土。近年来科学家在组蛋白甲基化修饰领域投入了大量资源，该领域也已发表众多科研成果，细数组蛋白甲基化研究历程我们会发现早在1960年RNA的合成即被证明受到了组蛋白中氨基的甲基化调节[9,10]，但是直到2000年，才发现了第一个组蛋白KMT，即人源SUV39H1（KMT1A），该工作由ThomasJenuwein和他的同事完成，并证明该酶从酵母到人具有高度保守性[11]。由于KMT1A的发现，后续根据SET结构域的同源性搜索，Dillon等人先后确定了数十种KMT[12]。另外，除了含有SET结构域的甲基转移酶之外，还有一类组蛋白甲基化转移酶不含有SET结构域即KMT4，但两种类型甲基转移酶具有一个共同点即是都以S-腺苷-甲硫氨酸（SAM）作为甲基供体[12-15]。甲基化修饰具体分为以下几种类型，图1.2.1b组蛋白甲基化普遍机制[16]。其中赖氨酸上可以发生单甲基、二甲基、三甲基化，精氨酸上可以发生单甲基化、对称二甲基化和非对称二甲基化，另外据报道组蛋白也可以发生单甲基化修饰[10,17-20]。现今为止，研究最为广泛的甲基化位点包括赖氨酸的H3K4、H3K9、H3K27、H3K36、H3K79以及H4K20和精氨酸的H3R2、H3R8、H3R17、H3R26、H4R3。回首过去，很长一段时间科学界认为组蛋白甲基化修饰是一种不可逆的修饰，直到H3K4去甲基化酶KDM1（LSD1）的发现证明了组蛋白甲基化修饰为可逆的修饰类型[21]。按照该研究的思路，现如今已发现一大批甲基转移酶和组蛋白去甲基化酶，他们分别识别不同的底物，作用在不同的甲基化位点履行着去除甲基的功能[22]。但是值得注意的是组蛋白上的甲基化标记并不孤立存在。同一组蛋白
【参考文献】：
期刊论文
[1]SRC-3/AIB1:transcriptional coactivator in oncogenesis[J]. Sophia Y TSAI,Ming-jer TSAI. Acta Pharmacologica Sinica. 2006(04)
本文编号：3133444
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