沙门菌噬菌体YSP2尾丝蛋白鉴定及功能研究
发布时间：2021-04-15 04:37
鸡白痢沙门菌（Salmonella pullorum）是一种常见的禽类病原菌,可引起雏鸡关节炎、腹泻和食欲不振等一些急性系统性疾病,可以通过鸡胚垂直传播,还会通过粪便和饮用水经消化道和呼吸道水平传播。感染鸡白痢沙门菌会导致鸡的生产性能下降,明显降低种蛋孵化率,或引起鸡群的大规模发病和死亡,严重影响畜禽健康,造成重大经济损失。沙门菌是我国农业部要求重点监测的14种动物疫病病原菌之一,所有种畜禽场必须净化。而且在食品安全方面,所有涉及的食品现行标准中,均不得检出沙门菌,这也使沙门菌的净化不仅仅涉及畜禽养殖行业,更关乎食品安全和公共卫生安全。近年来由于抗生素的滥用,鸡白痢沙门菌已经对多种抗生素产生耐药性,日益成为影响家禽养殖业和公共卫生安全的重要病原菌,严重制约养禽业的发展,影响公共卫生安全。噬菌体作为一类能特异性识别裂解病原微生物的一种病毒,可利用其宿主特异性对特定微生物进行检测。尾丝蛋白是噬菌体特异性识别宿主的物质基础,筛选表达出噬菌体的尾丝蛋白在特定微生物检测净化等方面具有重要意义。本实验对噬菌体YSP2进行纯化浓缩后,使用蛋白质多肽分子鉴定技术对其进行全蛋白质谱分析,结果得到52个蛋...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
密度梯度离心后的噬菌体YSP2Fig.1-1BacteriophageYSP2afterdensitygradientcentrifugation
第二篇研究内容第一章噬菌体YSP2的总蛋白质谱分析及尾丝蛋白分析19菌属的噬菌体具有极大相似性；而Chaperonin只与氨基酸数据库中的噬纤维菌属噬菌体具有相似性；Galactose-1-phosphateuridylyltransferase的确定则来自数据库中的乳酸菌噬菌体。图1-2噬菌体YSP2蛋白质谱基峰Fig.1-2BasepeakofphageYSP2proteinspectrum
第二篇研究内容第一章噬菌体YSP2的总蛋白质谱分析及尾丝蛋白分析201.3.3尾丝蛋白氨基酸比对分析实验前期根据噬菌体全基因测序结果，扩增ORF35、ORF44两段假定尾丝蛋白基因，构建原核表达载体，并验证成功后构建重组表达菌株，ORF35、ORF44理论扩增片段大小分别为2409bp、3777bp，电泳结果如图1-3所示，条带大小符合预期；之后经过连接转化后用BamHI、XhoⅠ酶切鉴定、PCR扩增验证，酶切理论片段大小约为5329bp和2409bp、3777bp，酶切验证电泳结果如图1-4所示，PCR扩增验证结果如图1-5所示，条带大小符合预期。但是在探究蛋白表达条件的实验中一直没能成功表达尾丝蛋白，在对基因片段进一步分析后，对比数据库中相应的氨基酸的功能，选择了长度为1503bp的ORF35的截短片段35Q（图1-6），并进行后续实验。通过比对分析可知，35q可能为噬菌体YSP2的尾丝蛋白基因序列，该尾丝蛋白含有500个氨基酸，大约为55KDa。35Q与沙门菌噬菌体phaSE-2尾丝蛋白，沙门菌噬菌体vB_SenS_PHB07尾丝蛋白和柠檬酸杆菌噬菌体CF1DK-2017尾丝蛋白的同源性分别为83.40%，61.20%和60.40%（见图1-7）。图1-3ORF35、ORF44PCR扩增结果Fig.1-3ORF35,ORF44PCRamplificationproducts1：ORF35PCR扩增产物；2：ORF44PCR扩增产物；M：DL5000DNAmarker
【参考文献】：
期刊论文
[1]一株山羊源肠炎沙门氏菌对小鼠的致病性研究[J]. 谭烁,冯帆,陈极奎,汤承,岳华. 安徽农业科学. 2018(13)
[2]利用蛋白质组技术快速鉴定噬菌体结构蛋白[J]. 赵飞扬,邢少贞,孙强,裴广倩,米志强,安小平,童贻刚,任慧英. 中国抗生素杂志. 2017(09)
[3]鸡白痢沙门菌研究进展[J]. 殷俊磊,李求春,耿士忠,潘志明,焦新安. 中国兽医学报. 2016(09)
[4]全球禽肉生产和贸易中的沙门菌风险评估与控制[J]. G.Mead,A.M.Lammerding,N.Cox,M.P.Doyle,F.Humbert,A.Kulikocskiy,A.Panin,V.P.do Nascimento,M.Wierup. 中国家禽. 2011(05)
[5]解决沙门氏菌困扰养禽业的技术途径[J]. 包启明,刘文奎. 中国家禽. 2002(09)
硕士论文
[1]鸡白痢沙门菌噬菌体裂解酶LySP2在毕赤酵母中的表达及其初步应用[D]. 张楸杨.吉林大学 2018
[2]鸡白痢沙门菌噬菌体的分离鉴定及其初步应用[D]. 袁玉玉.吉林大学 2016
本文编号：3138682
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
密度梯度离心后的噬菌体YSP2Fig.1-1BacteriophageYSP2afterdensitygradientcentrifugation
第二篇研究内容第一章噬菌体YSP2的总蛋白质谱分析及尾丝蛋白分析19菌属的噬菌体具有极大相似性；而Chaperonin只与氨基酸数据库中的噬纤维菌属噬菌体具有相似性；Galactose-1-phosphateuridylyltransferase的确定则来自数据库中的乳酸菌噬菌体。图1-2噬菌体YSP2蛋白质谱基峰Fig.1-2BasepeakofphageYSP2proteinspectrum
第二篇研究内容第一章噬菌体YSP2的总蛋白质谱分析及尾丝蛋白分析201.3.3尾丝蛋白氨基酸比对分析实验前期根据噬菌体全基因测序结果，扩增ORF35、ORF44两段假定尾丝蛋白基因，构建原核表达载体，并验证成功后构建重组表达菌株，ORF35、ORF44理论扩增片段大小分别为2409bp、3777bp，电泳结果如图1-3所示，条带大小符合预期；之后经过连接转化后用BamHI、XhoⅠ酶切鉴定、PCR扩增验证，酶切理论片段大小约为5329bp和2409bp、3777bp，酶切验证电泳结果如图1-4所示，PCR扩增验证结果如图1-5所示，条带大小符合预期。但是在探究蛋白表达条件的实验中一直没能成功表达尾丝蛋白，在对基因片段进一步分析后，对比数据库中相应的氨基酸的功能，选择了长度为1503bp的ORF35的截短片段35Q（图1-6），并进行后续实验。通过比对分析可知，35q可能为噬菌体YSP2的尾丝蛋白基因序列，该尾丝蛋白含有500个氨基酸，大约为55KDa。35Q与沙门菌噬菌体phaSE-2尾丝蛋白，沙门菌噬菌体vB_SenS_PHB07尾丝蛋白和柠檬酸杆菌噬菌体CF1DK-2017尾丝蛋白的同源性分别为83.40%，61.20%和60.40%（见图1-7）。图1-3ORF35、ORF44PCR扩增结果Fig.1-3ORF35,ORF44PCRamplificationproducts1：ORF35PCR扩增产物；2：ORF44PCR扩增产物；M：DL5000DNAmarker
【参考文献】：
期刊论文
[1]一株山羊源肠炎沙门氏菌对小鼠的致病性研究[J]. 谭烁,冯帆,陈极奎,汤承,岳华. 安徽农业科学. 2018(13)
[2]利用蛋白质组技术快速鉴定噬菌体结构蛋白[J]. 赵飞扬,邢少贞,孙强,裴广倩,米志强,安小平,童贻刚,任慧英. 中国抗生素杂志. 2017(09)
[3]鸡白痢沙门菌研究进展[J]. 殷俊磊,李求春,耿士忠,潘志明,焦新安. 中国兽医学报. 2016(09)
[4]全球禽肉生产和贸易中的沙门菌风险评估与控制[J]. G.Mead,A.M.Lammerding,N.Cox,M.P.Doyle,F.Humbert,A.Kulikocskiy,A.Panin,V.P.do Nascimento,M.Wierup. 中国家禽. 2011(05)
[5]解决沙门氏菌困扰养禽业的技术途径[J]. 包启明,刘文奎. 中国家禽. 2002(09)
硕士论文
[1]鸡白痢沙门菌噬菌体裂解酶LySP2在毕赤酵母中的表达及其初步应用[D]. 张楸杨.吉林大学 2018
[2]鸡白痢沙门菌噬菌体的分离鉴定及其初步应用[D]. 袁玉玉.吉林大学 2016
本文编号：3138682
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