连翘属抗寒相关基因GPAT的克
发布时间：2021-04-19 14:36
低温是限制林木、农作物分布及生长发育的主要因素,气温骤降对林木的损害巨大,造成极大的经济损失。连翘（Forsythia）声为木犀科连翘属植物为落叶灌木,连翘主要分为东北连翘（Forsythiamandshurica）和金钟连翘（Forsythia suspense）。高等植物质膜中脂肪酸不饱和度和冷敏感关系密切。甘油-3-磷酸酰基转移酶（GPAT）是磷脂酰甘油（Phosph-atidglglycerol,PG）生物合成过程中的第一个酰基酯化酶,直接决定植物膜PG的不饱和度。在抗冷植物中,GPAT优先选择18:1作为底物;在冷敏感植物中,GPAT优先选择16:0作为底物。由此导致二者生物膜的饱和度及其在低温下的流动性不同,进而影响其耐冷性。本研究以连翘属的两个材料,金钟连翘和东北连翘为研究材料。主要研究成果如下:（1）克隆了连翘属GPAT基因,分别命名为FsGPAT和FmGPAT。序列分析表明两个基因序列长度均为1347bp,编码448个氨基酸。连翘属GPAT基因具有GPAT基因家族的保守结构域GPATN结构域与LPLAT结构域。（2）连翘属GPAT与拟南芥10个G...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
1.1 低温胁迫
1.2 植物膜质与植物抗逆
1.3 植物耐寒基因研究进展
1.4 GPAT研究进展
1.5 连翘研究进展
第二章 连翘属GPAT基因克隆与序列分析
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 质粒与菌株
2.1.3 酶与其他试剂
2.1.4 溶液和培养基配制
2.1.5 仪器及生物学软件
2.2 试验方法
2.2.1 连翘属总RNA的提取
2.2.2 反转录合成第一链cDNA
2.2.3 金钟连翘FsGPAT基因5'端克隆
2.2.4 连翘属GPAT基因全长克隆
2.3 结果与分析
2.3.1 连翘属GPAT基因克隆
2.3.2 连翘属GPAT基因序列分析
2.3.3 GPATN端结构域
2.3.4 LPLAT结构域
2.3.5 连翘GPAT蛋白亚细胞定位预测
2.3.6 连翘GPAT蛋白质膜定位预测
2.3.7 连翘GPAT蛋白结构预测
2.3.8 同源性比对分析
2.4 小结
第三章 FsGPAT基因载体构建及遗传转化
3.1 材料
3.1.1 菌种和载体
3.1.2 酶和试剂
3.1.3 溶液和培养基配制
3.1.4 实验仪器
3.2 试验方法
3.2.1 pCAMBIA-FsGPAT真核表达载体构建
3.2.2 pCAMBIA1302-F sGPAT重组质粒转化农杆菌LBA4404
3.2.3 转FsGPAT基因农杆菌侵染烟草
3.2.4 转FsGPAT基因烟草检测
3.3 结果与分析
3.3.1 pCAMBIA1302-FsGPAT重组质粒
3.3.2 转FsGPAT基因转农杆菌
3.3.3 转FsGPAT基因农杆菌PCR检测
3.3.4 转FsGPAT基因烟草检测
3.4 小结
第四章 连翘属GPAT表达量分析
4.1 qPCR法分析连翘中GPAT相对表达量变化
4.1.1 试验方法
4.1.2 结果分析
4.2 酶联免疫吸附法分析连翘中GPAT含量变化
4.2.1 植物材料
4.2.2 其他试剂
4.2.3 实验仪器
4.2.4 试验方法
4.2.5 结果分析
4.3 小结
第五章 结论
参考文献
致谢
攻读学位论文期间发表文章
【参考文献】：
期刊论文
[1]河南连翘不同极性部位的HPLC指纹图谱[J]. 周琳琳,郝敏,白雁,雷敬卫,谢彩侠,胡小莉,张迪文. 中国实验方剂学杂志. 2017(07)
[2]栀子、连翘等中药配方颗粒体外肝细胞毒性研究[J]. 任艳青,李葆林,田宇柔,牛丽颖,甄亚钦,王鑫国. 河北中医药学报. 2017(01)
[3]耐冷调节基因及其在植物耐冷基因工程中的应用新进展[J]. 段俊枝,周雷,潘英华,姚国新,任银玲. 作物杂志. 2014(06)
[4]花生甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆与序列分析[J]. 迟晓元,潘丽娟,陈明娜,陈娜,杨珍,王通,王冕,和亚男,禹山林. 花生学报. 2013(04)
[5]连翘栽培技术[J]. 吴谦. 现代农业科技. 2013(18)
[6]植物抗寒相关功能与调控基因研究进展[J]. 姚晓华. 中国农学通报. 2013(27)
[7]植物GPATs基因研究进展[J]. 刘聪,肖旦望,施春霖,胡学芳,邬克彬,官春云,熊兴华. 遗传. 2013(12)
[8]植物抗寒基因研究进展[J]. 刘文英,张永芳,张东旭. 山西大同大学学报(自然科学版). 2012(06)
[9]连翘的研究进展[J]. 胡静,马琳,张坚,常艳旭. 中南药学. 2012(10)
[10]植物抗寒相关转录因子研究进展[J]. 曹红利,岳川,王新超,杨亚军. 江苏农业学报. 2012(04)
本文编号：3147742
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
1.1 低温胁迫
1.2 植物膜质与植物抗逆
1.3 植物耐寒基因研究进展
1.4 GPAT研究进展
1.5 连翘研究进展
第二章 连翘属GPAT基因克隆与序列分析
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 质粒与菌株
2.1.3 酶与其他试剂
2.1.4 溶液和培养基配制
2.1.5 仪器及生物学软件
2.2 试验方法
2.2.1 连翘属总RNA的提取
2.2.2 反转录合成第一链cDNA
2.2.3 金钟连翘FsGPAT基因5'端克隆
2.2.4 连翘属GPAT基因全长克隆
2.3 结果与分析
2.3.1 连翘属GPAT基因克隆
2.3.2 连翘属GPAT基因序列分析
2.3.3 GPATN端结构域
2.3.4 LPLAT结构域
2.3.5 连翘GPAT蛋白亚细胞定位预测
2.3.6 连翘GPAT蛋白质膜定位预测
2.3.7 连翘GPAT蛋白结构预测
2.3.8 同源性比对分析
2.4 小结
第三章 FsGPAT基因载体构建及遗传转化
3.1 材料
3.1.1 菌种和载体
3.1.2 酶和试剂
3.1.3 溶液和培养基配制
3.1.4 实验仪器
3.2 试验方法
3.2.1 pCAMBIA-FsGPAT真核表达载体构建
3.2.2 pCAMBIA1302-F sGPAT重组质粒转化农杆菌LBA4404
3.2.3 转FsGPAT基因农杆菌侵染烟草
3.2.4 转FsGPAT基因烟草检测
3.3 结果与分析
3.3.1 pCAMBIA1302-FsGPAT重组质粒
3.3.2 转FsGPAT基因转农杆菌
3.3.3 转FsGPAT基因农杆菌PCR检测
3.3.4 转FsGPAT基因烟草检测
3.4 小结
第四章 连翘属GPAT表达量分析
4.1 qPCR法分析连翘中GPAT相对表达量变化
4.1.1 试验方法
4.1.2 结果分析
4.2 酶联免疫吸附法分析连翘中GPAT含量变化
4.2.1 植物材料
4.2.2 其他试剂
4.2.3 实验仪器
4.2.4 试验方法
4.2.5 结果分析
4.3 小结
第五章 结论
参考文献
致谢
攻读学位论文期间发表文章
【参考文献】：
期刊论文
[1]河南连翘不同极性部位的HPLC指纹图谱[J]. 周琳琳,郝敏,白雁,雷敬卫,谢彩侠,胡小莉,张迪文. 中国实验方剂学杂志. 2017(07)
[2]栀子、连翘等中药配方颗粒体外肝细胞毒性研究[J]. 任艳青,李葆林,田宇柔,牛丽颖,甄亚钦,王鑫国. 河北中医药学报. 2017(01)
[3]耐冷调节基因及其在植物耐冷基因工程中的应用新进展[J]. 段俊枝,周雷,潘英华,姚国新,任银玲. 作物杂志. 2014(06)
[4]花生甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆与序列分析[J]. 迟晓元,潘丽娟,陈明娜,陈娜,杨珍,王通,王冕,和亚男,禹山林. 花生学报. 2013(04)
[5]连翘栽培技术[J]. 吴谦. 现代农业科技. 2013(18)
[6]植物抗寒相关功能与调控基因研究进展[J]. 姚晓华. 中国农学通报. 2013(27)
[7]植物GPATs基因研究进展[J]. 刘聪,肖旦望,施春霖,胡学芳,邬克彬,官春云,熊兴华. 遗传. 2013(12)
[8]植物抗寒基因研究进展[J]. 刘文英,张永芳,张东旭. 山西大同大学学报(自然科学版). 2012(06)
[9]连翘的研究进展[J]. 胡静,马琳,张坚,常艳旭. 中南药学. 2012(10)
[10]植物抗寒相关转录因子研究进展[J]. 曹红利,岳川,王新超,杨亚军. 江苏农业学报. 2012(04)
本文编号：3147742
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